第3章 节 蛋白质化学01功能氨基酸-肽-分类 .ppt

（三）纸层析 （四）薄层层析 （五）离子交换层析 3.3.5 氨基酸的制备和用途 目前氨基酸的制备方法有5种： （1）直接发酵法； （2）添加前体发酵法； （3）酶法； （4）化学合成法； （5）蛋白质水解提取法。 通常将直接发酵法和添加前体发酵法统称为发酵法。 氨基酸的合成 通过对菌株的诱变处理，产生的新微生物某代谢物在体内积累，从而达到生产的目的。 直接发酵法以葡萄糖，氨等为原料。 应用直接发酵法生产氨基酸产量最大的是谷氨酸，其次是赖氨酸，其余可以生产的品种有苏氨酸、异亮氨酸、结氨酸、精氨酸。组氨酸、脯氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸等。 1.直接发酵法 氨基酸的化学合成 又称为微生物转化法。这种方法使用葡萄糖作为发酵碳源、能源，再添加特异的前体物质，以避免氨基酸合成途径的反馈抑制作用，经微生物作用将其有效地转化为目的氨基酸。 目前成功地用邻氨基苯甲酸作为前体，工业生产色氨酸；用甘氨酸作为前体工业化生产丝氨酸。 2．添加前体发酵法 氨基酸的化学合成 用微生物产生的酶作催化剂，直接使底物转化为目标氨基酸。具有工艺简单，周期短、耗能低、专一性强、收率高等特点。 3、酶法 氨基酸的化学合成 反丁烯二酸 ＋NH3 －－ L-天冬氨酸 3、酶法 天冬氨酸酶 氨基酸的化学合成 L-天冬氨酸 ＋H2O－－L-丙氨酸＋CO2 3、酶法 天冬氨酸-?-脱羧酶 氨基酸的化学合成 ?-氯-L-丙氨酸＋H2S--L-半胱氨酸＋HCl 3、酶法 半胱氨酸脱硫基酶 氨基酸的化学合成 甘氨酸 ＋甲醛 --－ L-丝氨酸 3、酶法 丝氨酸转羟甲基酶 氨基酸的化学合成 甘氨酸 ＋乙醛 －－ L-苏氨酸 3、酶法 苏氨酸醛缩酶 氨基酸的化学合成 醛与氢氰酸和氨反应得到氰氨化物，经水解得到外消旋的氨基酸。 4.化学合成法 （1）Strecker合成法 氨基酸的化学合成 ?-酮酸与氨作用，生成亚胺，再还原成外消旋的氨基酸。 4.化学合成法 （2）还原氨化法 氨基酸的等电点 侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的pK’1和pK’2的算术平均值. pI = (pK’1 + pK’2 )/2 对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK’值的算术平均值。 酸性氨基酸：pI = (pK’1 + pK’R-COO- )/2 碱性氨基酸：pI = (pK’2 + pK’R-NH2 )/2 对于R基不解离的氨基酸而言，计算起来非常简单： pI＝（pK1+pK2）/2 若是R基解离的，氨基酸就有了多级解离，这种情况按下面的步骤来计算：a.由pK’值判断解离顺序。 总是pK1 pK2pK3…，即谁pK’值小，谁先解离。b.按照解离顺序正确写出解离方程式：简式，注意解离基团的正确写法。c.找出呈电中性的物质，其左右pK值的平均值就是氨基酸的等电点： pI＝（pK左+pK右）/2 3.2.5 氨基酸的化学性质 1．?-氨基参与的反应 用途：可以用来直接测定氨基酸的浓度。 （1）与甲醛发生羟甲基化反应 NH2 OH R CH COOH + HNO2 R CH COOH+H2O+N2 Van Slyke 法测氨基氮（体积）的基础。 N2中的1/2为氨基氮。 用途：氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。 （2）与亚硝酸反应 （3）酰化反应 用途：用于保护氨基以及肽链的氨基端测定等。 （4）烃基化反应 用途：是鉴定多肽N-端氨基酸的重要方法。 二硝基复苯 Sanger 法测定N末端氨基酸基础 （4）烃基化反应 用途：是鉴定多肽N-端氨基酸的重要方法。 苯异硫氰酸 —N=C=S + N—CH—COOH H H R PITC —N—C—N—CH—COOH H H R S PTC-氨基酸 —N—C H R S N C C O PTH-氨基酸 pH8.3 无水HF 苯异硫氰酸酯PITC 苯氨基硫甲酰衍生物 苯乙内硫脲衍生物 Edman降解法基础 （5）生成Schiff’s碱的反应 用途：是多种酶促反应的中间过程。 氮原子与碳原子用双键连结形成的一类化合物 （6）脱氨基和转氨基反应 用途：酶催化的反应。 （1）成盐反应 氨基酸与碱作用生成相应的盐。氨基酸的碱金属盐能溶于水,而重金属盐则不溶于水。 2．?-羧基参与的反