检测膀胱癌患者尿液中microrna-126的电化学生物传感器的制备-preparation of electrochemical biosensor for detecting microrna - 126 in urine of bladder cancer patients.docxVIP

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2018-05-28 发布于上海
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检测膀胱癌患者尿液中microrna-126的电化学生物传感器的制备-preparation of electrochemical biosensor for detecting microrna - 126 in urine of bladder cancer patients.docx

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检测膀胱癌患者尿液中microrna-126的电化学生物传感器的制备-preparation of electrochemical biosensor for detecting microrna - 126 in urine of bladder cancer patients

符号说明英文缩写MiRNA-126英文全称MicroRNA-126中文全称微小RNA-126PNAPeptidenucleicacid肽核酸PAMAMPoly(amidoamine)dendrimers聚酰胺PAMAM-Au-AgPoly(amidoamine)dendrimer聚酰胺-金-银goldandsilvernanoclusterscompositeAnti-digoxin/HRP/抗地高辛/HRP抗体HAuCl4AgNO3NaBH4NHSGoldchlorideSilvernitrateSodiumborohydrideN-hydroxysuccinimide氯金酸硝酸银硼氢化钠N-羟基琥珀酰亚胺EDC1-ethyl-3-3(3-dimethylaminoprop1-乙基-3-3（3-二甲氨yl)carbodiimide基）亚胺MCHMercatohexanol巯基乙醇BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白SSCSalinesodiumcitrate柠檬酸钠GCEGlasscarbonelectrode玻碳电极RetElectron-transferresistance电阻抗H2O2PBSHydrogenperoxidePhosphatebufferedsaline过氧化氢磷酸盐缓冲液CVCyclicvoltammetry循环伏安法EISElectrochemicalimpedance电化学阻抗法spectroscopySEMScanningelectronmicroscope扫描电子显微镜TEMTransmissionelectronmicroscope透射电子显微镜UV-visspectraUltraviolet-visiblespectra紫外-可见光谱1nmNanometer纳米CConcentration浓度MMole摩尔mMMillimole毫摩尔mLMilliliter毫升μLMicroliter微升mVMillivolt毫伏sSecond秒minMinute分钟hHour小时dDay天RSDRelativestandarddeviation相对标准偏差pHHydrogenionexponent氢离子当量浓度指数2检测膀胱癌患者尿液中microRNA-126的电化学生物传感器的制备摘要MicroRNA已经成为癌症早期筛查中的一种主要生物标志物，因其存在于患者的唾液，尿液和其他分泌液中，便于早期，稳定，无创性检查。尿液中microRNA-126的浓度变化和膀胱癌的发生有密切关系。因此，寻找一种理想的方法检测尿液中microRNA-126的浓度，对早期诊断膀胱癌有着非常重要的意义。microR-126在膀胱移行细胞癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁组织和正常膀胱组织，microR-126可能作为重要的抑癌基因参与膀胱移行细胞癌的发生和发展过程,并可能是膀胱癌转移的潜在标志。目前用于microRNA的方法操作繁琐，灵敏度低，且不能进行定量检测。本研究利用玻碳电极表面修饰石墨烯，聚酰胺-金-银纳米材料制成的生物传感器直接检测尿液中的microRNA-126。并对传感器的重复性，稳定性和选择性进行分析。1.电极表面材料的修饰：壳聚糖分散的石墨烯固定在玻碳电极表面，增强了传感器的导电性，促进电极进一步修饰聚酰胺-金-银纳米材料的稳定性。2.发夹结构的捕获探针的固定：聚酰胺-金-银（PAMAM-Au-Ag）3纳米材料提供充足的表明结合位点和发夹结构的捕获探针（肽核酸PNA）结合，从而进一步和目标链杂化固定。3.酶催化底物反应和信号放大：捕获探针和目标链结合后，打开的发夹结构的另一端和信号探针结合，信号探针末端修饰有地高辛，当加入anti-digoxin/HRP时，HRP可以催化底物过氧化氢发生氧化还原反应，从而产生电子传递信号。4.传感器检测的条件优化：捕获探针和信号探针的浓度；酶的浓度比例；过氧化氢的浓度。5.传感器的性能考察：标准曲线制定；重复性，选择性和稳定性分析。本研究得到如下结果：1.紫外可见光分析聚酰胺-金-银纳米材料的性能，并比较PAMAM-Au纳米材料、PAMAM-Ag纳米材料和PAMAM-Au-Ag纳米材料的导电性质。扫描和透射电镜证实传感器的修饰成功。循环伏安曲线和电化学阻抗图谱表征传感器的修饰过程，表明导电材料对玻碳电极的修饰增加了氧化还原过程中电子的传递效率。2.差分脉冲法用于检测目标物加入后，酶催化下最后产生的电流变化，根据电流随浓度的变化从而制定标准曲线。此传感器检测的目标物浓度是1.0fM到10nM范围内呈现线性相关，回归方程式为I(μA)=5.336log[C/M]+99.102(R2=0.985)，计算得到检测下限为0.79fM（S/N=3）。3.该传感器性能优越：批