hhv8病毒载量与kaposi肉瘤的相关性分析-correlation analysis between hh v8 viral load and kaposi sarcoma.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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hhv8病毒载量与kaposi肉瘤的相关性分析-correlation analysis between hh v8 viral load and kaposi sarcoma.docx

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hhv8病毒载量与kaposi肉瘤的相关性分析-correlation analysis between hh v8 viral load and kaposi sarcoma

摘要目的：检测卡波西肉瘤（KS）和对照组中HHV-8DNA的拷贝数；分析两组样本中，HHV-8载量的差异；分析不同分期KS皮损中，HHV-8载量的差别；探讨HHV-8载量在KS发病机制中的意义。方法：选取我科KS石蜡标本结节、斑片、斑块共20例和SCC6例，分别提取基因组DNA，进行HHV-8开放阅读框架（ORF）26PCR扩增，建立ORF26的质粒标准品，运用实时荧光定量PCR方法检测KS与SCC中的病毒载量。结果：HHV-8ORF26目的片段成功制备，获得稳定的重组质粒，保持了目的片段的特异性和序列完整性，标准曲线参数良好，ORF26标准品Ct值与其相应梯度稀释标准品浓度呈良好线性关系，扩增效率为89.916%。成功检测了Kaposi肉瘤与鳞癌中的病毒载量，但所检测的KS与SCC中的病毒载量比较无明显差别（t=1.794,P=0.087）,P0.05。分析卡波西肉瘤中不同临床表型病毒载量的比较（F=1.399,P=0.274）无统计学意义。结论：HHV-8载量与KS临床分期无关系。HHV-8在KS组织标本中DNA拷贝数极低，推测HHV-8在KS发病机制中不是靠增殖速度来致病，而是以病毒自身基因编码的各种基因同源物参与疾病的发生。关键词：卡波西肉瘤；鳞状细胞癌；实时荧光定量PCR；病毒载量；论文类型：A（基础研究）基金项目：国家自然科学基金地区科学基金项目AbstractObjective:Detectionofkaposissarcoma(KS)andControlgroupHHV-8DNAcopynumber;Analysisoftwogroupsofsamples,theHHV-8loaddifference;AnalysisofdifferentstagesoflesionsKSaboutthedifferenceofHHV-8load.DiscussessignificanceofHHV-8loadsinKSpathogenesis.Methods:DivisionKSparaffinspecimensnodules,plaques,,plaqueof20patientsandSCC6cases,andwereextractedgenomicDNAforHHV-8openreadingframe(ORF)26PCRamplificationandORF26plasmidstandard,theuseofreal-timefluorescentquantitativePCRmethodtodetecttheviralloadinKSandSCC.Results:HHV-8ORF26objectivefragmentwassuccessfullyprepared,andtoobtainastablerecombinantplasmid,tomaintainthespecificityandsequenceintegrityofthetargetfragment,agoodstandardcurveparameters,agoodlinearrelationshipORF26standardCTvalueanditscorrespondinggradientdillutionstandardconcentration,Theamplificationefficiencyof89.916%.SuccessfuldetectionofKaposissarcomaandsquamouscellcarcinomainviralload.AlthoughthereareverysignificantdifferencesdetectedinKSandSCCwasnosignificantdifferenceintheviralload（t=1.794,P=0.087）,P0.05.AnalysisofKaposissarcomaclinicalphenotypeofviralloadcomparison(F=1.399,P=0.274)wasnotstatisticallysignificant.Conclusions:ThereisunrelatedinHHV-8loadandKSclinicalstage.HHV-8DNAcopynumberintissuesamplesKSisverylow,suggestingthatHHV-8inthepathogenesisofKSproliferationdoesnotdependonthespeedofthedisease,butthevirusitselfgenesencodinghomologsofthevariousgenesinvolvedindisea