结肠癌细胞中 cacybpsip核转位后其下游信号分子的筛选-screening of downstream signal molecules of cacybpsip after translocation in colon cancer cells.docxVIP

pGC-FU-CBP-SBP-cacyBP-3XNucleartargetingsequences.Thevirustiterisupto2×108determinedbyquantitativePCR.ThelentivirusofCBP-SBP-CacyBP-3XNucleartargetingsequencestransfectedthehumanSW480cellsandthefusionproteinexpressedsuccessfully.ActinmaybeoneproeinwhichcaninteractwithCacyBP/SIPinvolvedincoloncancerdevelopment.KEYWORDS:CacyBP/SIP,Tandemaffinitypurification(TAP),mmunoprecipitation(IP)中英文缩略词英文缩写英文全称中文译名CacyBPCalcylinBindingProtein钙周期素结合蛋白TAPTandemaffinitypurification串联亲和层析IPImmunoprecipitate免疫沉淀MTTtetraozoliumblue咪唑蓝PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis硝酸纤维素膜CBPcalmodulin-bindingpeptide钙调蛋白结合肽SBPstreptavidin-bindingpeptide链霉素结合肽SCFSkp1-Cullin-F-boxproteinSCF复合物UbUbiquitin泛素ECLEnhancedchemiluminescence增强化学荧光显色UPPubiquitin-proteasomepathway泛素蛋白酶体途径MOIMultiplicityOfInfection感染复数FBSFetalbovineserum胎牛血清PMSFPhenylmethysulfonylfluoride苯甲基磺酰氟化物Skp2S-phasekinaseassociatedprotein2S期激酶相关蛋白2SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠BAF53BRG1-associatedfactors53BRG1相关因子53BRG1brahma-relatedgene1BRM相关基因1目录正文1前言1第一部分目的基因CBP-SBP-CACYBP-3X-NUCLEARTARGETINGSEQUENCES慢病毒的包装4材料和方法4结果11讨论13第二部分慢病毒感染人SW480细胞及融合蛋白CBP-SBP-CACYBP-3X在人SW480细胞中的表达情况15材料和方法15结果21讨论24第三部分TAP串联亲和层析法筛选与CACYBP/SIP相互结合的下游信号蛋白分子并行质谱鉴定26材料和方法26结果30讨论34第四部分免疫沉淀（IP）筛选与CACYBP/SIP相互结合的下游信号蛋白分子并行质谱分析35材料和方法35结果37讨论39结论43正文参考文献44综述48综述参考文献52致谢54攻读学位期间发表的学术论文目录55个人简历56前言结肠癌是一种常见的恶性肿瘤，在我国是第四位常见癌症和致死原因，随着生活水平的提高，结肠癌呈现出高发的趋势，而且越来越年轻化。CacyBP/SIP是一种新发现的与细胞的增殖分化和多种癌症进程相关的蛋白。前期研究发现：CacyBP/SIP在结肠癌组织中高表达，在癌旁组织和正常组织中低表达或是不表达，且CacyBP/SIP与结肠癌的转移和预后密切相关。1996年，Filipek于艾氏腹水瘤中首次发现一种蛋白，可以与S100家族蛋白结合，而S100是一种钙结合蛋白，故命名此蛋白为Calcyclinbindingprotein（CacyBP）[1]。2001年Matsuzawa发现其与Siah-1也可以发生相互作用，故又命名为Sigh-1interactingprotein（SIP）[2]，简称：CacyBP/SIP。CacyBP/SIP主要分布在脑和脾，在胃肠道，肝脏，和心脏中也有其表达，在肾脏、淋巴组织和直肠中却分布较少[3]。CacyBP/SIP蛋白除了与上述两种蛋白相互作用以外，还与多种靶蛋白相互作用，如：Skp1，微管蛋白和ERK1/2等也可以发生相互作用，进而参与到细胞或组织器官的各个生命过程中，从而对生物体产生重要的影响。CacyBP/SIP同时能与微管蛋白和肌动蛋白结合，在两者之间起到一个连接的桥梁作用[1]，参与神经细胞的生长分化等过程，如轴突或是树突的发生[2]。在其他一些细胞中也起到细胞支架作用。在人类的神经胶质瘤细胞SH-SY5Y和结肠癌SW480细胞中，当细胞内的Ca2+浓度升高时，CacyBP/SIP转移至核周或是进入细胞核[4