结核杆菌hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制分析-effect of mycobacterium tuberculosis hsp 16.3 on apoptosis of alveolar macrophages in infected mice and its mechanism analysis.docx

石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日中文摘要Ⅰ英文摘要Ⅲ英文缩略词表Ⅴ前言1材料和方法4结果12讨论24结论28参考文献29文献综述32致谢39作者简介40导师评语41目的：探讨结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3在结核杆菌感染中对小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法：分别将结核杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变菌株（△H37Rv）、结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株（H37Rv）、卡介苗株Hsp16.3基因缺失突变菌株（△BCG）、卡介苗菌株（BCG）以及无菌生理盐水（空白对照）通过小鼠尾静脉注入小鼠体内以建立小鼠的感染模型，并在感染后的1d、3d、5d、7d、9d、11d、13d、15d分离及鉴定小鼠肺泡巨噬细胞，用激光共聚焦显微镜技术检测及鉴定结核杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞，流式细胞术检测不同时相感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡率，WesternBlot检测感染小鼠肺泡巨噬细胞内Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白的表达。结果：激光共聚焦显微镜下观察到△H37Rv组、H37Rv组、△BCG组、BCG组小鼠肺泡巨噬细胞内有标记MTB65KD的绿色荧光，而空白对照组未见绿色荧光，证实结核杆菌Hsp16.3基因缺失突变菌株和结核杆菌正常菌株在感染小鼠后均能被小鼠肺泡巨噬细胞大量吞噬。△H37Rv组和H37Rv组凋亡率均高于对照组，△H37Rv感染组的巨噬细胞凋亡率1～7d内逐渐升高，至7d时达到高峰，随后逐渐降低；H37Rv感染组的巨噬细胞凋亡率在1～9d内逐渐升高，至9d时达到高峰，随后逐渐降低；△H37Rv感染组与H37Rv感染组相比，1d至7d内，各时间段△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率均显著高于H37Rv感染组（P0.05），随时间延长，巨噬细胞凋亡程度发生了逆转，9d至11d内，△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率低于H37Rv感染组，而13至15d内，△H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率高于H37Rv感染组，差异均有统计学意义（P0.05）；△BCG组凋亡率1d至7d内呈明显下降趋势，7d后巨噬细胞凋亡率变化趋于平稳与正常对照组差异无统计学意义，而BCG组巨噬细胞凋亡率仅在感染9d时与正常对照组差异有统计学意义；△BCG组的巨噬细胞凋亡率在1d至5d内显著高于BCG组（P0.05），7d至15d内，△BCG组与BCG组巨噬细胞凋亡率无明显差异；不同时相H37Rv组和BCG组比较以及△H37Rv组与△BCG组比较，巨噬细胞凋亡率差异均有统计学意义。H37Rv组和△H37Rv组的巨噬细胞Caspase-3和Bcl-2蛋白表达水平均高于正常对照组；1d至7d内，H37Rv感染组和△H37Rv感染组的巨噬细胞Caspase-3表达水平逐渐升高，至第7d达到高峰，且△H37Rv感染组在第13d时出现第二次高峰，但Caspase-3表达水平均高于H37Rv感染组，差异有统计学意义；1d至13d内，△BCG组的巨噬细胞Caspase-3表达水平逐渐降低但始终高于BCG组（P0.05），BCG组不同时相的巨噬细胞Caspase-3表达水平无明显变化，与正常对照组相比差异无统计学意义；不同时相H37Rv组巨噬细胞Caspase-3表达水平均高于BCG组；感染后第1d，△H37Rv组巨噬细胞Caspase-3表达水平低于△BCG组（P0.05），但第3d后△H37Rv组巨噬细胞Caspase-3表达水平始终高于△BCG组（P0.05）；在感染的早期（1～7d），△H37Rv感染组Bcl-2的表达水平无明显变化，但在9d后逐渐升高；H37Rv感染组巨噬细胞内Bcl-2的表达水平1～7d内无明显变化，7d后逐渐升高，但△H37Rv感染组Bcl-2的表达水平始终低于H37Rv组且7d后表现更为显著；BCG组和△BCG组的巨噬细胞Bcl-2蛋白表达水平均高于正常对照组，△BCG组巨噬细胞内Bcl-2的表达水平1～5d逐渐升高，随后降低，至7d后变化趋于平稳且在3～11d内Bcl-2的表达水平高于△H37Rv组（