金莲花口服液逆向连续循环提取工艺及质量控制分析-analysis of reverse continuous circular extraction technology and quality control of trollius chinensis oral liquid.docxVIP

金莲花口服液逆向连续循环提取工艺及质量控制研究摘要金莲花口服液现收载于《中国药典》2010版第二增补本，由金莲花单味药材组成，被广泛应用于热毒内盛引起的上呼吸道感染、扁桃体炎、咽炎等症。在中医药领域，金莲花具有悠久的药用历史，《本草纲目拾遗》中谓其“味苦，性寒，无毒”，可治“口疮、吼肿、耳疼目痛”。现代人以先进技术手段以其入药、代茶，在抗菌消炎、清热解毒上发挥了超凡的功效。在抗生素滥用的今天，药物耐药性增强，金莲花口服液有希望作为治疗上呼吸道感染、咽炎、扁桃体炎等疾病的主要药物。金莲花口服液传统生产制备过程中，采用立式静态提取罐加热煎煮的方法提取，但生产中该提取方法存在一些问题：1.金莲花药材在多次、长时间传统煎煮过程中，杂质（蛋白质、鞣质等）浸出多，给口服液制剂后续的过滤除杂增加负荷。2.煎煮后的金莲花药材烂糊状，造成滤网堵塞，提取液与药渣分离困难，需频繁地更换滤网，使药液被污染的风险加大，此风险也是影响液体制剂质量的高风险点。3.耗费大量的提取溶剂，导致后续蒸发浓缩时间长，能耗高。当前金莲花口服液质量控制标准为荭草苷含量测定，单一成分含量高低不能说明产品内在的质量，质量标准有待提高。为提高金莲花口服液的提取工艺水平，解决工业生产中的实际问题，和提高金莲花口服液成品的质量控制水平，开展本课题研究。目的：1.对金莲花口服液的逆向连续循环提取工艺参数进行优化，并与现行金莲花口服液制备标准中的提取工艺比较，筛选金莲花口服液提取最佳工艺。2.采用高效液相色谱法研究并建立金莲花水提浓缩液中荭草苷和牡荆苷的含量测定方法；用紫外分光光度法建立金莲花水提浓缩液中总黄酮含量测定方法。3.采用高效液相色谱法建立金莲花口服液的特征指纹图谱并同时测1荭草苷和牡荆苷含量的方法，并对市售和采用逆向连续循环提取中试放大生产的金莲花口服液产品进行相似度评价和质量分析。方法：1.以总黄酮、荭草苷、牡荆苷的含量为考察指标，以提取温度、提取时间、药材粒径、加水倍数为实验因素，每个因素设计3个水平，采用L18（37）正交试验法对逆向连续循环提取金莲花口服液的工艺参数进行优选。以总黄酮含量、荭草苷含量、牡荆苷含量、浸出率、溶剂消耗量、提取时间为指标，比较金莲花口服液采用逆向连续循环提取工艺（以下简称新工艺）与传统煎煮工艺的优劣。.采用HPLC色谱法，用AgilentHC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；甲醇（A）-乙腈(B)-0.1%磷酸水溶液(C)为流动相，按以下梯度洗脱：0～45min(4%A-12%B-84%C)、45～60min(10%A-20%B-70%C)；以349nm为检测波长；流速1.0mL·min-1；柱温25℃；进样量5μL的色谱条件，测定金莲花水提浓缩液中荭草苷和牡荆苷的含量。采用紫外-可见分光光度法，以芦丁为对照品，通过亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠络合显色，于510nm处用外标法测定金莲花水提浓缩液中总黄酮的含量。.采用HPLC色谱法，用PhenomenexC18(4.6×250mm,5μm)色谱柱；A（乙腈）-B（含0.1%磷酸和1%四氢呋喃的溶液）为流动相进行梯度洗脱：0min～20min～38min～55min～70min，同时A相为3%～16%～16%～30%～50%；流速：1.0mL·min-1；柱温25℃；检测波长230nm；进样量10μL的色谱条件，建立金莲花口服液指纹图谱和荭草苷、牡荆苷的含量测定方法。采用国家药典委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》对市售及新工艺中试放大生产的金莲花口服液进行指纹图谱相似度评价和质量分析。结果：1.金莲花口服液最优提取条件：逆向连续循环提取，提取温度90℃，提取时间2h，药材粒径10目，加水倍数20倍。2.采用HPLC法测定金莲花水提浓缩液中荭草苷和牡荆苷：荭草苷的线性范围为18.46～295.37μg·mL-1（r＝0.9999），牡荆苷的线性范围为5.84～93.44μg·mL-1（r＝0.9999），荭草苷平均回收率96.07%，RSD为0.74%（n＝6），牡荆苷平均回收率97.73%，RSD为1.42%（n＝6）。采2用UV-VIS法测定金莲花水提浓缩液中总黄酮：芦丁的线性范围为10.56～63.36μg·mL-1（r=0.9999），总黄酮平均回收率为99.39%，RSD为1.52%（n＝6）。3.建立的金莲花口服液HPLC指纹图谱确定了20个共有峰，市售金莲花口服液指纹图谱峰相似度均0.948，新工艺中试放大生产的金莲花口服液与5个厂家市售产品所生成的对照指纹图谱比较，相似度均0.958；荭草苷和牡荆苷的含量测定：荭草苷的线性范围为10.10～392.80μg·mL-1（r＝0.9999），牡荆苷的线性范围为2.40～94.90μg·mL-1（