分子克隆用酶基因和 与蛋白质工程课件.pptVIP

§4 分子克隆用酶;一、DNA限制性内切酶 ;1、DNA限制性内切酶种类;;限制性内切酶命名: 限制性内切酶命名的次序如下： A） 用3个字母代表来源的生物（如 Bam 代表 Bacillus amyloliquefaciens ） B） 1个字母或阿拉伯数字代表菌株（ Bam H） C） 1个罗马字母代表发现或鉴定的次序（ Bam HI） 同切酶(同裂酶) : 同切酶指两个酶的识别位点和酶切位点相同，如SphI(CGTACG)和BbuI(CGTACG)互为同切酶。 ?同尾酶 这一类的限制酶来源各异,识别的靶字序列也不相同, 但产生相同的粘性末端。 ;4、酶单位;;TaKaRa公司 限制酶在各种缓冲液中的相对活性;5、RFLP（限制性片段长度多态性）;RFLP基本步骤;图右表示了植物A叶绿体基因组小部分DNA的限制图以及植物A和另外2个材料(B和C). 的RFlP形式．如果植物A与祖先种相比变化很小，那么假定它发生了2个突变．突变1，在13Kb片段上出现一新的限制性位点，产生9Kb和4Kb的片段．突变2，在形成植物C的过程中，一个限制性位点消失，产生11Kb片段，6Kb和5Kb的消失．基于这一系列变化，就可列出系统发育图(图左).;6、限制性内切酶酶切实验步骤;DNA片段和质粒载体的连接 及用酶;带有非互补突出端的片段的连接;带有相同的粘性末端的片段的连接;三、碱性磷酸酶alkaline phosphatase;带有平末端的片段的连接;思考题