抗hbv脂质前药自组装体的分析-analysis of self-assembly of anti - hbv lipid prodrugs.docxVIP

中 文 摘 要乙型肝炎病毒（HBV）是全球范围内慢性肝炎肝硬化和肝癌的首要成因。核苷类药 物通过抑制病毒 DNA 聚合酶的作用, 终止 DNA 链的延长和合成, 从而达到抑制病毒复 制的作用。乙型肝炎等疾病之所以缺乏有效的治疗药物, 除治疗药物本身的药理作用尚 不够理想外, 其主要原因是肝靶向性差。前体药物可提高药物肝靶向性、增强治疗效果、 降低毒副作用。HepDirect 前药是一类新的磷酸酯和膦酸酯前药，可以特异性地被肝细 胞 CYP450 同工酶 CYP3A4 酶氧化, 释放活性形式的核苷酸或核苷膦酸。该类药物具有 明显的肝靶向性且未发现与副产物相关的毒性。若将其与新型的药物传递系统联系起来 会有更好的效果。自组装药物传递系统(self-assembled drug deliverysystems，SADDS)是指具有一定表 面活性的两亲性药物或前药在水溶液中自组装形成胶束、囊泡或立方相等高度分散的聚 集体。SADDS相对于其它微粒分散体系在体内更稳定。药物经脂质衍生化后如满足一定 分子构型特点，就可在水中自组装成SADDS。这类SADDS既有脂质前药的性质，如生 物膜渗透性增强，又由于高度分散性在体内有巨噬细胞靶向性等特点。本文的设计思想是将磷酸酯前药与自组装药物传递系统相结合，再赋予其肝靶向长 循环作用，可以集合他们的优势，更好的发挥药物抗病毒作用，同时又能极大的降低药 物毒副作用。本文以嘌呤类核苷类似物阿德福韦（PMEA）为模型药物，经过酯化环合后得到磷 酸酯前药(APE)，再经过亲酯衍生化后得到抗 HBV 两亲性脂质前药：月桂酰阿德福韦磷 酸酯前药（LAPE），加入具有肝靶向长循环作用的半乳糖苷制备成自组装体，并考察其 体内外行为的一般规律。具体研究内容包括：1. 抗 HBV 脂质前药的合成及性质设计并合成了抗 HBV 脂质前药：正辛酰阿德福韦磷酸酯前药，正癸酰阿德福韦磷 酸酯前药，十二酰阿德福韦磷酸酯前药，十四酰阿德福韦磷酸酯前药，十六酰阿德福韦 磷酸酯前药，十八酰阿德福韦磷酸酯前药，并对其结构进行确证。考察了前药的 Langmuir 单分子膜的性质。磷酸酯前药用脂肪长链衍生化后亲脂性大大增强，氢键和疏水相互作 用是决定 LAPE 溶解性和能否形成自组装体的关键因素；前药 LAPE 分子的成膜性较好，III具有形成自组装体的两亲性。2. 半乳糖苷的合成及性质 设计并合成了长循环肝靶向材料：二十聚乙二醇十六烷基醚半乳糖苷 G20DE，并经行了结构鉴定。PEG 链使其具有长循环作用，半乳糖能够发挥肝靶向的作用。将其与抗 HBV 脂质前药混合制备自组装体，能够得到形态较好、相对稳定的制剂，使其发挥长 循环肝靶向的作用。3. 抗 HBV 脂质前药自组装体的制备及结构特点用甲醇（MeOH）将前药与 G20DE 溶解，采用注入法制备得到了高度分散、均匀稳 定的 LAPE 自组装体。透射电子显微镜和激光粒度分析仪观察其形态、粒径和 Zeta 电位， 结果表明自组装体为类球形囊泡，平均粒径为 68nm，Zeta 电位-20.4mV。分析 LAPE 自 组装体形成的机理为：LAPE 分子在十二碳链基团的疏水相互作用和核苷基团的氢键作 用下自发排列成双分子层结构，在机械力的作用下弯曲形成类球形囊泡。G20DE 的脂肪 链部分插入到囊泡结构中形成新的自组装体。4. 抗 HBV 脂质前药自组装体的物理稳定性 考察高温、高压、离心沉降、室温长期放置等对 LAPE 自组装体稳定性的影响。结果显示高温、高压对自组装体的粒径几乎无影响，前药含量几乎不变；高速离心（≤10000rpm）后自组装体粒径无变化，粒子不易聚集，重分散性好。LAPE 自组装体 室温放置能长期保持稳定。5. 抗 HBV 脂质前药自组装体的化学稳定性以 HPLC 为含量测定方法，考察了 LAPE 自组装体在不同 pH 缓冲液、不同动物血 浆及小鼠组织匀浆中的降解情况。结果表明：LAPE 在 pH 2.0 缓冲液中很快降解，t1/2 为 24.8h；pH 5.5 环境下相对稳定，t1/2 为 277h；在 pH 7.4 环境中能长时间保持稳定， t1/2630h。而 LAPE 自组装体在不同种属动物血浆中的降解速率有所差别，其中在小鼠 和大鼠血浆中降解较快，在人和犬血浆中降解缓慢。LAPE 自组装体在小鼠肝组织匀浆 中降解最快，t1/2 小于 1h。在小鼠脾组织匀浆中降解较快，而在肾中降解最慢。6. 抗 HBV 脂质前药自组装体的初步药效学通过对 HBV 转染小鼠灌胃给药来考察 LAPE 自组装体的抗病毒效果。结果表明 LAPE 自组装体具有较好的抗 HBV 作用，LAPE 能够在体内降解为原药阿德福韦磷酸酯 前药抑制病毒的复制，发挥药理作用。IV7. 自组装体在