抗rh-rh resistance.docxVIP

摘 要，一目 的从 已 建 株 的 抗淋 巴 细 胞 杂 交 瘤 中 克 隆 抗 体 基 因构 建 人 鼠嵌一，合 抗 体 基 因并 在 真 核 细 胞 中 表 达 抗 人 重 组 碱 性 成 纤 维 生 长 因 子嵌 合。抗 体一，、、方 法从 分 泌 抗鼠单 抗的 杂 交 瘤 细 胞 中 通 过’、、一、、，扩 增克 隆基 因从 质 粒和中 扩 增克 隆基。，一，因然 后通 过 融 合分 别 把基 因 及基 因 连 接 起 来测 序一，鉴 定 后 分 别 插 入 真 核 表 达 载 体重 组 表 达 质 粒 转 化 二 氢 叶 酸 还 原一。酶 缺 陷 型 中 国 仓 鼠 卵 巢’细 胞采 用 间 接检 测 表 达 产 物 的 人 源，、，性 及 其 抗 原 结 合 活 性表 达 产 物 的 相 对 分 子 量 通 过队确 定、结 果获 得 了 鼠源 可 变 区基 因 和 人 源 恒 定 区基 因通 过 融，合得 到 了 嵌 合 抗 体 的左 右 的 完 整 轻 链 基 因 和左 右 的 完 整 重 链 基，一因序 列 测 定 表 明 所 克 隆 的 抗 体 基 因 是 功 能 性 抗 体 的和区 基 因分 别 构 建一，，了 重 链 重 组 表 达 质 粒及 轻 链 表 达 质 粒在 转 化一细 胞 的 培 养 上 清 中 可 检 测 到 抗嵌 合 抗 体 的 表 达试 验 证 实该 嵌，，合 抗 体 具 有 人 源区并 可 与 原 鼠有 相 同 的 抗 原 结 合 活 性转 化 后 的，抗 性 细 胞 经 过 亚 克 隆 化 和 加 压 培 养最 后 获 得 了株 稳 定 的 工 程 细 胞 株其 培 养。一，上清 液 中 的 抗 体 表 达 量 为一结 论在 真 核 细 胞 中 成 功 地 表 达 抗的 人 鼠嵌 合 抗 体为 其 进 一 步。进 行 临 床 研 究 奠 定 了 基 础关 键 词碱 性 成 纤 维 生 长 因 子嵌 合 抗 体基 因 表 达细 胞一一一一’，，，一一一，一沙一竹一一诚一一，。，第 一 部 分绪 论，，抗 体 技 术 的 发 展迄 今 已 走 过 了 三 代 的 历 程第 一 代 是 基 于 免 疫 学 原 理用，，抗 原 免 疫 动 物从 其 血 清 中获 取 多 克 隆 抗 体第 二 代 是 运 用 细 胞 工 程 技 术通 过。、杂 交 瘤 来 制 得 单 克 隆 抗 体单 克 隆 抗 体 技 术 可 得 到 多 种 的特 异 抗 体在 疾 病 的诊，，断 上 发 挥 了 很 大 的 作 用如用 放 射 标 记 的 单 抗 探 测 肿 瘤 的位 置对 病 毒 感 染 的。，被 动 免 疫 治 疗 及 免 疫 抑 制 等但 由 于 单 克 隆 抗 体 大 都 来 自于 鼠源在 人 体 内使 用。时 有 较 强 的 免 疫 原 性当 在 人 体 内 反 复 使 用 鼠源 单 抗 时人 体 会 产 生 人 抗 鼠抗 体，。，。这 限 制 了 它 在 疾 病 治 疗 上 的 应 用而 若 用 人 杂 交 瘤 来 生 产 人 源 单 抗 又。，。难 以 成 功为 了 克 服 单 抗 的 这 些 缺 点第 三 代 抗 体 技 术 应 运 而 生它 是 在 基 因 水，，平 上对 抗 体 进 行 改 造或 者 构 建 完 全 新 型 的 抗 体所 得 到 的 就 是 基 因 工 程 抗 体，最 早 的 基 因 工 程 抗 体 是年 莫 里 森等 报 道 的 人 一 鼠嵌 合 抗 体人一。鼠嵌 合 抗 体 的 产 生 给 基 础 研 究 和 临 床 应 用 带 来 了 深 刻 的 变 革 和 影 响嵌 合 抗 体年，，，，，从 杂 交 瘤 细 胞 中 分 离 出 功 能 性 可 变 区 基 因与 人恒 定，。区 的 基 因 连 接插 入 适 当 质 粒构 建 鼠一 人 嵌 合 的 重 链 和 轻 链 基 因 质 粒 载 体共，，同 转 染 宿 主 细 胞如 骨 髓 瘤 细 胞表 达 鼠一 人 嵌 合 抗 体因 为 这 种 嵌 合 抗 体 含，。，一的 人 抗 体的 鼠抗 体所 以 它 的 特 点 是 大 大 减 少 鼠源 性 单 克 隆 抗 体 的，免 疫 原 性同 时 又 保 留 了 亲 本 抗 体 的 特 异 性 和 亲 和 力此 外通 过 连 接 上 不 同 的。人 恒 定 区 基 因 而 改 变 抗 体 的 效 应 功 能嵌 合 抗 体 研 制 现 状，。鼠源 单 克 隆 抗 体 作 为 异 源 性 蛋 白质 在 人 体 内可 诱 发 抗 鼠抗 体 的 产 生所 以 只‘ 。，有 将 其 人 源 化才 能 有 效 地 应 用 于 临 床 治 疗嵌 合 抗 体 是 指 通 过 基