昆虫npv垂直传递和pcr检测的分析-analysis of insect npv vertical transmission and pcr detection.docxVIP

新疆农业大学硕士学位论文 新疆农业大学硕士学位论文 昆虫 昆虫 NPV 垂直传递和 PCR 检测的研究 PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 10 摘 要 昆虫核型多角体病毒(NPV)是一种重要的病原微生物和生物杀虫剂 不仅具 有专一性强 对环境和人畜安全 不杀伤天敌等优点 而且在其应用后能在自 然界中长期存在 从而引起病毒流行病的大发生 可在较长时间内自然控制害 虫种群密度的增长 在害虫的持续控制研究中发挥着重要的作用 本文对室内保存的病毒株系 HaNPV 的毒力进行生物测定并根据实验结果计 算出 LC30 LC50 LC70 和 LC90 用上述 4 种浓度感染健康的棉铃虫 3 龄幼虫 分 别收集感染未致死的棉铃虫蛹进行传代饲养,对不同处理的各代间幼虫的死亡 率 化蛹率 羽化率和平均单头蛹重等生物学特性参数进行了研究和分析 并 用 PCR 方法对传代棉铃虫的蛹和卵进行检测 从而对 NPV 室内垂直传递作了比 较系统和详细的研究 实验结果如下 50(1)实验室保存病毒株系 HaNPV 的致死中浓度LC50和致死中量LD50分 别为 3.44 104PIB/ml 和 1995PIB 当用 1.0 107 PIB/ml 的浓度感染棉铃虫 3 龄幼虫时 其感染半致死时间 LT 为 4.77 天 当浓度为 1.0 106PIB/ml 时 50 50LT 为 5.73 天 用 1.0 105PIB/ml 的浓度感染时为 6.63 天 50 2用 LC70 LC50 和 LC30 的浓度感染寄主时 各处理的子一代F1和子二 代F2的幼虫死亡率分别为 15 50.42% 21.67 47.92%和 12.22 34.44% 均远高于对照的 7.50 8.33% 在子三代F3和子四代F4中 除了处理 LC30 在子三代F3中的幼虫死亡率17.78%明显高于对照8.83%外 其它处 理与对照均无明显差异 3在幼虫化蛹率方面 亲代F0和子一代F1与对照之间存在明显 差异 处理 LC70 LC50 和 LC30 的幼虫化蛹率分别为 61.37 72.28% 77.31 87.36% 和 77.39 87.05% 处理 LC90 亲代F0的化蛹率仅为 32.14% 均低于对照的 93.69 96.63% 在子二代F2子三代F3和子四代F4中 各处理与 对照均差异不明显 4处理 LC90 LC70 LC50 和 LC30 的亲代和子代在羽化率方面也存在差异 在 F0 代中 处理 LC90 和 LC70 的羽化率分别为 50.00%和 51.52% 明显低于对照的 85.99% F1 代中 处理 LC70 的羽化率67%也远低于对照83.93%其它处 理与对照差异不明显 而在 F2 F3 和 F4 代中 处理和对照差异不明显 5 各处理在平均单头蛹重方面与对照也有明显的差异 在亲代 F0 中 各处理 0.1996 0.2356g 与对照 0.3036g 之间差异极显著 在子一代 F1 和子二代F2中 处理 LC70 和 LC50 与对照之间差异极显著 其它处理与对照无 差异 各处理在子三代F3和子四代F4代中与对照无差异 6 在参考其它昆虫 NPV 多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上 根据棉铃 虫多角体蛋白基因核苷酸序列 在其多态性丰富的区域设计引物POLH1-F: 5GTTAAGCCCGACACAATGAAGC 3 POLH1-R: 5ATGGGTTTGTAAAAGTTCTCCCA3 以 HaNPV 的 DNA 为模板做 PCR 扩增 成功扩增出了目的片段并对 PCR 扩增片段进 行回收 克隆和测序 测序结果表明所扩增的片段是 HaNPV 的多角体蛋白基因 的部分序列 以纯的 HaNPV 的基因组为模板做 PCR 扩增 其检测水平可达到 10fg 应用此检测体系从感染的虫卵和蛹中也成功检测到了病毒的存在 关键词 NPV PCR 垂直传递 流行病 毒力 STUDY ON VERTICAL TRANSMISSION AND PCR DETECTION OF INSECT NPV Qu Liangjian(Zoology) Supervised by prof. Wang Dengyuan and prof. Zhang Yongan ABSTRACT Insect nuclear polyhedrosis virus (NPV) are invertebrate-specific pathogens that have be