蓝染辅助腋淋巴结抽样与微转移检测在乳腺癌术中应用-application of blue dye-assisted axillary lymph node sampling and micrometastasis detection in breast cancer surgery.docxVIP

蓝染辅助腋淋巴结抽样与微转移检测在乳腺癌术中的应用摘要腋淋巴结(Axillary Lymph Node, ALN)状态是影响乳腺癌患者预后的最重要 因素，也是术前选择手术方式、术后选择辅助治疗的重要依据。在西方国家，前 哨淋巴结活检(sentinel lymph node biopsy, SLNB)、淋巴结抽样(Axillary Node Sampling, ANS)虽然都已用于预测腋淋巴结状况，但包括淋巴结定位和术中淋巴 结检测的最佳方案仍存在争议。本研究分为二部分，分别对淋巴结活检、术中淋巴结检测的合理化方案进行 探讨：第一部分研究 二种注射途径——癌周(Peritumoral, PT) 、 乳晕下(SA, Subareolar)对染料法 SLNB 的影响，以及染料法 SLNB 与染料法 SLNB 联合 ANS 预测腋淋巴结的准确性。第二部分探讨术中微转移检测的最佳方法。第一部分：连续收集 64 例临床Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌患者，随机分入 SA、PT 组。 患者麻醉成功后，取 1% 亚甲蓝 (Methylene Blue, MB)5ml 注入乳晕周围 12 点、 3 点、6 点和 9 点部位皮下或肿瘤周围深部。注射染料后 10min，切开皮肤及皮 下组织，游离上侧皮瓣至腋窝第Ⅰ水平，寻找、切除蓝染淋巴结，认定为前哨淋 巴结(Sentinel Lymph Node, SLN)。无论 SLNB 成功与否，均在胸小肌外缘（Ⅰ水 平），以腋淋巴结抽样(Axillary Node Sampling, ANS)方式触诊、切除 4 个可疑淋 巴结。分别标记 SLN 和抽样淋巴结，单独送快速病理检查。然后行腋窝淋巴结 清扫(Axillary Lymph Node Dissection, ALND)，腋清扫淋巴结送常规病理检查。 应用亚甲蓝进行 SLNB 时，SA 组的成功率、假阴性率、灵敏性、准确性分别为 84.9% (28/33)、13.6% (3/3+19)、86.4% (19/3+19)、100%(28/28)；PT 组分别为 61.3% (19/31)、36.8% (7/7+12)、63.2% (12/7+12)、100% (19/19)，SA、PT 组之间的差异具有显著性（p0.05）。不考虑注射部位时，SLNB 的灵敏性、特异性、准确 性、假阴性分别为 100%、48.5%、63.8%、24.3%；SLNB+ANS 则分别为 100%、 52.3%、67.2%、0%。结果显示在行 SLNB 时，SA 法成功率稍高于 PT 法；染料 法 SLNB+ANS 的阳性淋巴结检出率高于单用染料法 SLNB 的检出率。第二部分：应用冰冻切片(Frozen Section, FS)、快速免疫组化(Rapid Immuno-histochemistry, RAPID-IHC)、逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcriptase Polyme-rase Chain Reaction, RT-PCR)检测 SLN、抽样淋巴结内的转移。以 5μm 厚度从间 隔为 50μm 的二个层面上对淋巴结冰冻组织连续切取 3 张切片，1 张行 HE 染色， 另外 2 张行 RAPID-IHC，标志物分别为 CK19、muc1。冰冻剩余组织行 RT-PCR。 64 例患者用冰冻切片 HE、IHC、RT-PCR 共检查了 348 个淋巴结，其中冰冻切 片 HE 染色在 37 例患者中检出 139 个转移淋巴结；RAPID-IHC 在 41 例患者中 检出 152 个转移淋巴结。SLNB/ANS 术中病检阴性的患者中，RT-PCR 检测发现 有 3 个淋巴结表达 CK19、mammaglobin，1 个 SLN 同时表达 CK19、mucl、 mammaglobin。结果显示 RT-PCR 的灵敏性与冰冻切片 HE+RAPID-IHC 相当或稍 高一些，但由于肿瘤标志物在正常组织中也有少量表达，而且用分子学方法检出 转移的临床意义尚不明确，目前，冰冻切片 HE+ RAPID-IHC 检查是术中病理检 查较好的一种选择。但由于本研究样本含量较小，还需要大样本随机对照研究进 一步证实。关键词：乳腺癌，前哨淋巴结，淋巴结抽样，检出率，微转移Blue-dye assisted axillary node sampling and intraoperativ- e detection of micrometastasis in women with breast cancer The status of axillary lymph nodes remains the single most important prognostic factor and the most