利福布汀对大鼠腹膜纤维化模型中细胞色素p450 3a4表达的影响-effect of rifabutin on cytochrome p450 3a4 expression in rat peritoneal fibrosis model.docxVIP

利福布汀对大鼠腹膜纤维化模型中细胞色素P4503A4表达的影响贵阳医学院附属医院肾内科研究生：帅丹导师：甘平摘要目的：观察利福布汀对大鼠腹膜纤维化模型中细胞色色P4503A4表达的影响，探讨其在非细菌性腹膜炎症发病中的可能机制。方法：动物分组：60只SD大鼠按随机数字法分为3组。正常对照组(n=20,生理盐水NS)：每天一次腹腔注射生理盐水25ml，28天后，每天一次用生理盐水灌胃4ml，一共灌胃7天。腹膜纤维化模型组(n=20,高糖HGC)：4.25％腹透液按100ml／kg体重给予大鼠每天一次腹腔注射；脂多糖（LPS）用4.25％腹透液稀释为6mg／L，在第8、10、12、22、24、26天腹腔注射LPS(0.6mg／kg体重)，建立腹膜纤维化模型，28天后，每天一次用生理盐水灌胃4ml,一共灌胃7天。治疗组（n=20,利福布汀RBT）：腹膜纤维化型基础上，加用利福布汀(RBT)+生理盐水(NS)混悬液每天一次口服灌胃4ml(15.625mg/kg/d),一共灌胃7天。35天后分别处死每组各20只大鼠，取腹膜组织行HE染色病理学检查及行免疫组化检测壁层腹膜组织细胞色素P4503A4（CYP4503A4）的表达。结果:①HE染色，光镜下可见，NS组腹膜规律覆盖间皮细胞，其下为少量纤维结缔组织，无明显损伤，腹膜结构完整；HGC组和RBT组腹膜间皮细胞脱落，间皮下结缔组织增厚，可见成纤维样细胞及单核巨噬细胞浸润且有纤维素样物质沉积，另外腹膜组织新生小血管也有增多，上述现象在HGC组尤为明显。②免疫组化结果，背景几乎没有颜色或呈浅棕色，阳性产物为深浅不等，形状不规则棕色颗粒，经统计学分析，CYP4503A4表达在HGC组表达最低，NS组表达最高，各组间差异有统计学意义（P0.05）。结论：①大鼠腹膜纤维化模型中细胞色素P4503A4（CYP4503A4）的表达降低，考虑可能与大鼠腹膜纤维化的发生有关。②利福布汀增加大鼠腹膜纤维化模型中CYP4503A4的表达，从而可能延缓大鼠腹膜纤维化的发生。关键词：细胞色素P4503A4腹膜纤维化利福布汀前言持续性不卧床腹膜透析（CAPD）作为目前终末期肾脏病患者替代治疗方法之一，其疗效与血液透析相同，且因其操作简便等优势,因此越来越受到更多学者的关注。腹膜纤维化(PF)所致超滤衰竭是CAPD患者退出治疗的主要原因之一[1]。目前，对PF治疗上主要以预防为主，尚缺乏有效的具体防治对策。并且患者一旦出现腹膜纤维化，常需中止透析治疗。研究发现[2]，高渗透压糖化反应终产物糖降解产物可能破坏腹膜的完整性，而传统的腹膜透析液主要以葡萄糖作为渗透剂，而这类非生理性的腹膜透析液恰恰是导致腹膜透析相关性腹膜纤维化的主要原因。当前研究表明[3]，随着腹膜透析技术的发展，细菌性腹膜炎的发生几率越来越低，而非细菌因素所导致的无菌性腹膜纤维化呈逐年上升的趋势。机体的氧化应激与炎症反应相辅相成的关系普遍存在，而研究表明机体处于炎症反应时细胞色素P450活性下调，但具体机制尚未阐明[4]。细胞色素P450酶系(CYP450)是一组含亚铁血红素的酶，广发存在于细胞内质网膜上，因为它能与一氧化碳的结合物在450nm附近有吸收特征而得名。目前研究表明，在感染和炎症条件下，人及动物肝脏、肾脏和脑组织等的CYP450的表达及活性均显著降低，其中尤以CYP3A4亚型尤甚，该酶在体内许多内外源化合物的代谢中起着重要作用。利福布汀(rifabutin，RBT)是一种新的半合成药物，其化学结构类似于利福平，是一种利福霉素衍生物，具有广谱抗菌活性。其作用机制与利福平作用机制一样，能与微生物的DNA依赖性RNA多聚酶β亚基形成稳定的结合，因此抑制该酶活性，从而抑制细菌RNA的合成。虽然利福布汀的抗菌谱和抗菌机制与利福平相似，但在药效学和药物动力学特点上却显著优于利福平。利福布汀在药物动力学方面，具有良好的脂溶性，易于渗透人组织和体液．可迅速渗透人多型核白细胞，并在其中较长时间保持较高浓度，分布广，半衰期长而具有长效作用。细胞内浓度与细胞外浓度的比值为9-15（利福平为5）[5]。目前研究证明，利福布汀能使P450活力明显增高，其中CYP3A及CYPD2D6尤为明显[6]。目前国内外对于细胞色素P4503A4在腹膜组织中表达及与腹膜纤维化关系的研究尚少。现行的腹膜透析腹膜纤维化动物模型主要有高糖法、高糖+LPS法、高糖+大肠杆菌法、高糖+金黄色葡萄球菌法、低PH值法等[7]。研究发现高糖+红霉素组组织学上的病理改变更为明显。因此高糖+红霉素组致腹膜透析相关性的腹膜纤维化效果更佳。但考虑到需建立非菌性腹膜纤维化及造模时间有限性，且研究表明红霉素能影响细胞色素P450活性，故本实验采用高糖+LPS法。高糖+LPS法是经典的腹膜透析腹膜纤维化模型之一