利用itraq技术分析斑蝥素酸镁对人肝癌细胞hepg2蛋白质表达的影响-using it raq technology to analyze the effect of magnesium cantharidate on the expression of hepg 2 protein in human hepatoma cells.docxVIP

PAGE PAGE 2 MS bio-massspectrometry 生物质谱技术 MALD-TOF-MS mastrix assisted laser-desorption ionization time of flight mass spectrometry 固相蛋白质多肽离子化的 基质辅助激光解吸电离飞 行时间谱 MP metabolic process 代谢过程 MF molecular function 分子功能 PRG peptide reactive group 反应基团 RP report group 报告离子 RPMI-1640 roswell Park Memorial institut-1640 1640 培养基 SOP single-organism process 单一生物过程 SILAC stable isotope labeling with amino acids in cell culture 细胞培养条件下稳定同位 素标记技术 SRB HYPERLINK /link?url=DrEKsD3-NWYR42rBzmck4onl_me-UdE5zEb8PWVirhNA-dwu_F3kQg8FV97aLFFF sulforhodamine B 磺酰罗丹明 TUBA8 tubulin alpha-8 chain α-微管蛋白 8 TCA trichloroacetic acid 三氯乙酸 DE two dimentional gel electrophoresis 双向电泳 2D-LC two-dimensional liquid chromatography 二维液相色谱 利用 iTRAQ 技术研究斑蝥素酸镁对人肝癌细胞 HepG2 蛋白质表达的影响 摘 要 目的：利用定量蛋白质组学技术开展斑蝥素酸镁对人肝癌细胞 HepG2 的抗癌机制研 究；通过比较给药前后细胞蛋白质组的差异表达变化，探寻斑蝥素酸镁可能的作用靶 点和干预的信号通路，为斑蝥素类化合物的后续研究打下基础。 方法： 1、实验分组：将处于对数生长期的细胞，随机分为 2 组：对照组（Control）、斑 蝥素酸镁处理组（Cantharidin acid magnesium，CM）；各组继续培养 12 h。 2、利用等重同位素多标签相对定量（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation，iTRAQ）技术筛选差异表达蛋白（differentially expressed proteins，DEPs）。 3、利用生物信息学分析方法，对上述 DEPs 行基因本体（Gene Ontology，GO） 注释分析和调控通路（Pathway）注释分析。 结果： 1、给药 12 h 后人肝癌细胞 HepG2 增殖明显受到抑制，且细胞形态发生明显改 变。 2、以 Ratio 1.2 或 Ratio 0.83 且 p value 0.05 为筛选标准，共发现 298 个 DEPs， 包括 Tubulin alpha-8 chain（TUBA8）、TNF receptor-associated protein 1（TRAP1）等。 这些 DEPs 中，与肿瘤相关的有 31 个，其中 4 个显著上调，27 个显著下调。 3、GO 功能注释统计发现 1336 个蛋白质与生物过程（Biological Process，BP） 相关，694 个蛋白质与细胞组分（cellular component，CC）相关，392 个蛋白质与分 子功能（molecular function，MF）相关。 4、KEGG Pathway 数据库注释：86 个 DEPs 在 181 条 KEGG 信号/代谢通路中被 注释。其中，被注释 4 个以上 DEPs 的通路有 27 条，其中与肿瘤相关的有 9 条。其 中，最显著的通路为丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs） 信号转导通路。 结论： 1、斑蝥素酸镁能使肝癌细胞 HepG2 增殖能力显著下降，并能引起多种蛋白质表 达的变化。 2、斑蝥素酸镁可能是通过调控 TUBA8 和 TRAP1 的表达，以及干预 MAPK 信 号转导通路实现抑癌作用。 关键词：斑蝥素酸镁；肝癌细胞 HepG2；差异蛋白质组学； iTRAQ technology provides insights into influence on the prot eomics of HepG2 cell with treatment by Cantharidin acid magnesium Abstract Objective