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利用rnai技术敲除拟南芥atcdpk1和atcdpk1a基因的分析-analysis of knocking out atc dpk1 and atc dpk1 a genes in arabidopsis thaliana by rnai technology.docxVIP

利用rnai技术敲除拟南芥atcdpk1和atcdpk1a基因的分析-analysis of knocking out atc dpk1 and atc dpk1 a genes in arabidopsis thaliana by rnai technology.docx

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    利用rnai技术敲除拟南芥atcdpk1和atcdpk1a基因的分析-analysis of knocking out atc dpk1 and atc dpk1 a genes in arabidopsis thaliana by rnai technology

    Prof.LIGuo-JingAppIicantforMasterDegree:DONGTingTing(BiochemistryMoleclllarbiology)(CoUegeofLifeSciences，11l1lerMongoliaAgriclIlturalUlliversi句飞Hohhot010018，Chilla)目录1.5研究目的及意义...............................................92材料与方法.......................................................92.1实验材料.....................................................92.1.1植物材料...................................................92.1.2菌株和质粒.................................................92.1.3酶及化学试剂...............................................92.1.4溶液的配制................................................102.2实验方法....................................................122.2.1植物培养..................................................122.2.2CDPKl和CDPKla基因RNAi表达载体的构建132.2.3植物表达载体的农杆菌转化..................................252.2.4转基因植物的获得及纯合体的获得............................262.2.5转基因植物的分子鉴定......................................273结果与分析......................................................303.1CDPKl和CDPKla基因RNAi载体的构建303.1.1中间载体pHAN-Fx-Rx的构建303.1.2植物表达载体pART27-x的构建343.2pART27-x表达载体的农杆菌转化.353.3转基因植株的筛选............................................363.4转基因植株目的基因沉默和转录水平的半定挝RT-PCR检测373.4.1转基因纯合体CDPK-a目的基因沉默和转录水平的检测373.4.2转基因纯合体CDPK-c目的基因沉默和转录水平的检测383.4.3转基因纯合体CDPKla-2目的基因转录水平的检测.393.4.4转基因纯合体CDPKla-2基因沉默特异性的检测.394讨论............................................................394.1植物中基因沉默载体的选择及构建..............................394.2用RNAi技术研究拟商芥AtCDPKl和AtCDPKla基因功能.405结论............................................................40致谢..........................................................42参考文献....................................................43作者简介....................................................48插图和附表清单1.图1因2四3图4图5因6四7因8四9图1011.图11图12图13图14图15图16图17剧18剧19剧20剧21剧22剧23RNAi作用机制阁2CDPKs结构囚6拟商芥CDPK基因在染色体上的分布7构建重组质粒pART27吨的示意图15PCR扩增正义链和l反义链片段的电泳结果31重组质粒pGM-T-Fx的PCR鉴定结果31重组原本主pHAN-Fx的菌乎在PCR结果32重组质粒pHAN-Fx的陶切结果32重组原本主pGM-T-Rx的PCR鉴定结果33重组质粒pHAN-Fx-Rx的E自源:PCR结果33重组J贡粒pHAN-Fx-Rx的陶切结果34pHAN质粒囚括..............................

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