粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注后bcl-effects of granulocyte colony stimulating factor on bcl after cerebral ischemia-reperfusion in rats.docxVIP

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2及Bax表达的影响摘要目的观察大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型在给予粒细胞集落刺激因子（G-CSF）后脑组织Bcl-2及Bax表达的情况，探讨G-CSF的神经保护机制。方法将36只健康雄性SD大鼠按随机分组原则分为假手术组、模型+溶媒组及药物组共3组，每组12只。每组内随机将6只用于免疫组化及凋亡测定，6只用于脑梗死体积测定。模型+溶媒组及药物组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型；假手术组仅给予分离血管，不予结扎及栓塞血管。药物组分别于再灌注即刻、再灌注24小时给予皮下注射rhG-CSF（50μg/kg），共两次；模型+溶媒组于同样时间皮下注射同等容量生理盐水。造模后采用Longa5分制评分法行神经功能评分；采用TTC法测脑梗死体积；采用TUNEL法测凋亡细胞数；采用免疫组化法测Bcl-2及Bax表达情况并用医学图像分析系统测定灰度值。结果1神经功能评分：造模术后，模型+溶媒组及药物组均出现一定程度神经功能障碍，与模型+溶媒组相比，药物组神经功能评分明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05)。2脑梗死体积测定：大鼠脑组织经2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色后，梗死灶未见染色呈白色。与模型+溶媒组相比，G-CSF治疗后脑梗死体积减少；差异有统计学意义（P＜0.05)。3免疫组化：与假手术组相比，模型+溶媒组及药物组Bcl-2及bax的表达水平均明显升高，凋亡细胞百分率升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）；与模型+溶媒组相比，药物组Bcl-2表达增加，Bax表达减少，凋亡细胞百分率降低，差异均有统计学意义（P＜0.05)。结论1G-CSF治疗可以降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分，有利于肢体功能恢复；2G-CSF治疗可以缩小脑缺血再灌注大鼠的脑梗死体积；3G-CSF治疗可以减少大鼠脑缺血再灌注损伤后脑细胞的凋亡，增加Bcl-2的表达，减少Bax的表达。这可能是G-CSF神经保护作用的机制之一。关键词粒细胞集落刺激因子；脑缺血再灌注；Bcl-2；Bax；细胞凋亡EffectsofGranulocyte-ColonyStimulatingFactoronExpressionofBcl-2andBaxinRatswithFocalCerebralIschemiaReperfusionAbstractObjectiveToobservetheexpressionofBcl-2andBaxinbraintissueofthemiddlecerebralarteryocclusion/reperfusion(MCAO/R)model,whengivenGranulocyte-ColonyStimulatingFactor(G-CSF)treatment.AndtoexploreneuroprotectiveeffectofG-CSFanditsmechanism.MethodsThirty-sixadulthealthymaleSDratswererandomlydividedintosham-operatedgroup，vehidegroupandG-CSFtreatmentgroup.(n=12).6ratsineachgroupwererandomlyusedforimmunohistochemicalstainingandapoptosisdetermination.Theotherswereusedtomeasurethevolumeofcerebralinfarction.MiddlecerebralarteryocclusionandreperfusionmodelwasestablishedbysuturemethodinvehidegroupandG-CSFtreatmentgroup.Thesham-operatedgrouponlyreceivedseparatingofartery,arteryligationandembolizationwerenotreceived.RatsinG-CSFtreatmentgroupreceivedsubcutaneousinjectionofrhG-CSF(50μg/kg)immediatelyafterreperfusionand24hafterreperfusion.Model+vehiclegroupratswereinjectedthesamecapacityofsalineatthesametime.Infarctvolumewasmeasuredbytriphenyltetrazoliumchloridestaining.TUNELtechniquewascarriedouttodetectthechan