第四章 细胞工程制药工艺技术知识基础.pptVIP

重组人红细胞生成素生产工艺 转瓶机 返回 返回 胚胎移植又称受精卵移植，俗称人工授胎或借腹怀胎。它是将家畜的受精卵或发育数日的胚胎，从某一个体（供体）移植到同种动物的另一个体（受体），使之继续发育的技术。经胚胎移植产生的后代从受体得到营养发育成新个体，但其遗传物质则来自它的真正亲代，即供体动物和与之交配的公畜。 　　 利用胚胎移植，可以开发遗传特性优良的母畜繁殖潜力，较快地扩大良种畜群，在自然情况下，牛、马等母畜通常一年产1胎，一生繁殖后代仅仅16只左右；猪也不过百头。采用胚胎移植则使优良母畜免去了冗长的妊娠期，胚胎取出后不久即可再次发情、配种和受精，从而能在一定时间内产生较多的后代。如果向母畜注射促性腺激素，还可诱发其在一个发情期中排出比自然情况下更多的卵子，取得多个胚胎供移植之用。另外，由于胚胎可长期保存和远途运输，还为家畜基因库的建立，品种资源的引进和交换，以及减少疾病传播等提供了更好的条件。 返回 所谓细胞核移植技术，就是将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖即可被激活、分裂并发育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。以供体核的来源不同可分为胚细胞核移植与体细胞核移植两种。 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 * 生 物 制 药 工 艺 学 Biopharmaceutical technology 第四章 动物细胞工程制药技术 多莉的诞生 多莉的诞生 动物细胞工程 细胞融合 核 移 植 胚胎移植 细胞培养 单克隆抗体 动物细胞工程主要应用技术 动物细胞反应动力学、动物细胞反应器 动物细胞工程是指按照人们预定的设计，根据细胞生物学及工程学原理定向改造动物细胞遗传性的技术。 动物细胞培养 基本概念 动物细胞大规模培养方法 动物细胞培养条件 动物细胞培养操作方式 动物细胞培养基的制备 动物细胞培养过程的检测与工艺基的制备 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 制成 原代培养 细胞悬浮液 10代细胞 细胞贴壁 50代细胞 传代培养 剥离、分瓶 部分细胞“癌变”，无限传代 细胞株 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞 细胞系 动物细胞培养不能 最终培养成动物体 动物细胞培养的基本过程 取动物器官 和组织 幼龄鼠 剪碎组织 胰蛋白酶处理 单个细胞 细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 实例 常见生产用动物细胞系 Namalwa：从淋巴瘤病人中分离获得的类淋巴母细胞，非整体核型，2n=12～14，单X染色体，无Y染色体。表达IgM悬浮生长。外源基因的表达水平较高，可用无血清培养基高密度培养。已成功地表达了rhEPO、rhG-CSF、tPA等，已用于大规模生产干扰素，并批准上市。??????? WI-38:美国Wistar研究所从正常人胚肺组织分离获得的二倍体（diploid）成纤维（fibroblast）细胞系，贴附型生长，2n=46。细胞倍增时间24小时，寿命50代，第一个被用于制备疫苗。 人源细胞株系 CHO细胞：从中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary，CHO）中分离的上皮样（epithelial）细胞系，贴附型生长体性，是目前使用最为普遍和成熟的宿主细胞。属于贴壁生长细胞，可进行悬浮培养，对剪切力和渗透压有较高的忍受能力。蛋白质翻译后的修饰准确，表达产物的结构、性质和生物活性接近天然。 常见生产用动物细胞系 BHK：从幼仓鼠的肾脏（baby hamster kidney, BHK）中分离的成纤维样细胞，非整倍体，2n=44。用于增殖病毒，制备疫苗和重组蛋白。两种重组凝血因子Ⅷ，Bayer的Kogenate? FS、Aventis Behring的Helixate分别于1989和1994被FDA获准上市，1999年FDA批准Novo Nordisk的重组凝血因子VIIa（NovoSeven）上市，用于治疗血友病。 杂交瘤细胞：从小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞中分离获得杂交瘤细胞系，有SP2/O、J558L和NSO等。能在无血清培养基中高密度悬浮生长，容易转染和生长，能进行糖基化等加工修饰，大量分泌和高效表达。 哺乳动物细胞株系 ???????Sf21：是从秋黏虫（Spodoptera frugiperda，fall armyworm)卵巢细胞中分离得到的，细胞较大，容易放大，高效表达外源基因。?Sf-9：是从秋黏虫的卵巢细胞（SF21）中分离得到，最常用的昆虫表达细胞。倍增时间为18～24小时，能高效表达外源基因。?TN-5B1-4：是从粉纹夜蛾（Trichoplusia