细胞、细胞器及生物大分子.pptVIP

上述四种生物体细胞色素C的四级结构 蛋白质分析 A.纯化——获得用于研究的足够样品。 层析（根据大小）、电泳（根据电荷）、疏水层析、亲和层析、重组技术（加入纯化标签） B.测序——确定纯化蛋白质的初级结构。蛋白质测序 蛋白质测序利用Edman化学降解法（就是用化学试剂把肽链N端最后一个氨基酸降解下来，然后用层析的手段分离。然后再降解下一个，如此循环） 蛋白测序仪 C.质量测定——确定目标蛋白的分子质量 D.X-射线晶体衍射和核磁共振——确定目标样品的四级结构。 亲和层析——酶与底物作用，抗原抗体结合，配体受体结合等 质谱分析——将分子气化并离子化，再根据其在电磁场内偏离的程度来确定其大小。极其准确但昂贵，可以测定小于100KD的蛋白，有助于检测翻译后修饰 以四种碱基构成的脱氧核苷酸或核苷酸为基本单位通过3，5-磷酸二酯键连接成链状结构构成其一级结构 核酸的理化性质 DNA序列测定常用方法有如下3种： Maxam-Gilbert化学裂解法  化学裂解（直读，Sanger双脱氧末端法也是直读法）法是Maxam和Gilbert等人1977年创建的，用来测定DNA序列。化学法是用化学试剂在A、G、C、T处特定地裂解DNA片段，产生一簇各种长度的短链（等差数列 n=1），经过PAGE和放射自显影后，可以直接读出DNA的顺序。 某些试剂能修饰或破坏DNA链上特定核苷酸的碱基进而使N-糖苷键断裂，暴露出的糖环以β-消除反应，在3’和5’位上断裂磷酸二酯键。使戊糖脱落，用于嘌呤环的试剂是硫酸二甲酯，而联氨可用于肼解嘧啶环。 化学裂解法测序的原理 1、用放射性核素标记待测DNA一侧末端 2、将标记DNA分为G、A+G、C+T、C 4个反应体系 3、用不同的化学试剂处理不同反应体系，随机断裂DNA片段某种碱基中的任何一个，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的DNA片段的混合物 4、电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出DNA序列 表 特异断裂4种脱氧核苷酸的方法 Nucleic Acid Structure DNA double helix Watson and Crick , 1953. Two separate strands Antiparellel (5’?3’ direction) Complementary (sequence) Base pairing: hydrogen bonding that holds two strands together Essential for replicating DNA and transcribing RNA Sugar-phosphate backbones (negatively charged): outside Planner bases (stack one above the other): inside 三级结构：即超螺旋结构（Supercoiling） 三链、四链结构：三链DNA、端粒 RNA 结构: 许多RNA分子以一单链状态存在, 其通过分子内碱基的配对和相互之间的氢键结合， 形成复杂构像，而这种复杂性反映在细胞中RNA分子呈现不同角色的变化中。 tRNA Ribozyme RNA rRNA 物理性质： a.核酸具有高度的粘性，这主要是因为其有高螺旋率和相对僵硬的缘故； b.其浮力密度为1.7 g/cm-3，可通过密度梯度离心获得DNA； c.核酸具有旋光性和热特性，DNA和RNA的最大吸收波长均为260nm（用于定性定量检测核酸，测定核酸纯度），减色现象：双链DNA与单链DNA或RNA以及单个核苷酸相比，表现为着色不足，因此对紫外线吸收的程度是dsDNAssDNA/RNAnucleotide.在加热的情况下DNA会发生变性成单链，温度降低又可复性（回复双链结构）。 d. 超螺旋：非正常的螺旋状态，其中负超螺旋是进行复制和转录的基础，约占整个DNA的5%。 化学性质： 在pH4-11范围内比较稳定，过酸或过碱都会使其变性。 碱变性提取细菌质粒DNA即是基于此原理。 核酸扩增、杂交 变性，复性——PCR的依据 解链温度 杂交——southern，northern， 而western blot虽与上述杂交相似，但所依据原理不同 核酸测序 Sanger的酶学测序原理 Gilbert的化学测序法 自动测序仪的发明 C0t1/2是指什么? 人神经生长因子 cDNA序列 （3）多糖: 直链淀粉（alpha-Amylose）和纤维素 (cellulose) 是分别通过alpha(1-4) 和 beta(1-4