高效液相色谱xuigai.ppt

HPLC与GC的区别 在HPLC中，流动相是液体其粘度比气体大得多，而且是在室温下进行操作。因此组分在流动相中的扩散系数Dm比GC中的Dg要小得多。另外HPLC流动相的流速快，所以纵向扩散项对谱带扩张的影响很小，可以忽略不計。 故在H－u曲线中没极小值。　　 　 1.流动相对分离的影响  HPLC中,n由色谱柱质量决定，α主要受溶剂种类的影响，κ受溶剂配比的影响。 若固定相一定，改变流动相的组成就可以r21使改变； 改变流动相中各种溶剂的配比，就能有效地控制k值。 . 手性色谱法:适用于分离手性化合物的对应体. 超临界色谱法:适用于天药物,表面活 性剂,高聚物等物质的分离分析. * * * (1) 必须能溶解样品，并必须能润湿凝胶。 (2) 溶剂的粘度要小。 (3) 选择溶剂还必须与检测器相匹配。 常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲 基酸胺和水等。 以水溶液为流动相的凝胶色谱适用于水溶性样品，称为凝胶过滤色谱法（GFC）。 以有机溶剂为流动相的凝胶色谱适用于非水溶性样品，称为凝胶渗透色谱法（GPC）。  3．流动相 五、亲和色谱法（AC）简介 亲和色谱是利用生物大分子和固定相表面存在某种特异性亲和力，进行选择性分离的一种方法。 它通常是在载体表面先键合间隔臂（如环氧、联氨等）；随后，再连接上配基（酶、抗原或激素等）。这种配基只能和具有亲和力特性吸附的生大分子相互作用而被保留，没有这种作用的分子不被保留。 第五节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪的结构可分为四个主要部分 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 此外还配有辅助装置：如梯度洗脱，自动进样及数据处理等。 1．高压输液系统 由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。 要求： 密封性好， 输出流量恒定，压力平稳， 可调范围宽， 便于迅速更换溶剂及耐腐蚀。 类型：输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。 恒流泵：又称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复泵两种，应用最多的是机械往复泵。 特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关； 恒压泵：是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重视性差。 目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。 为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性， 操作时须注意下列事项： ①防止任何固体微粒进入泵体； ②流动相不应含有任何腐蚀性物质； ③泵工作时要防止溶剂瓶内的流动相被用完； ④不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液； ⑤流动相使用前应先脱气。　　 2．进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多，所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。 柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。 柱外展宽可分柱前和柱后展宽。 进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。 常用的进样器有二种： 1.隔膜注射进样器 2.高压进样阀：六通阀、双路进样阀等。 3. 分离系统——色谱柱 .色谱柱是液相色谱的心脏部件，它的作用是分离。 HPLC的色谱柱常用内壁抛光的不锈钢管，形状几乎全为直形。按主要用途分为： 分析型：柱长10～30cm，内径为2～5mm， 制备型：柱长10～30cm，内径20～40mm。 柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（＜20μm）一般采用匀浆填充法装柱. 4．检测系统 检测器 是高效液相色谱仪的关键部件之一。它的作用是把色谱洗脱液中组分的量转变为电信号。 按其适用范围可分为： 1.专属型检测器：它仅对被分离组分的某一性质有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光检测器等。 2.通用型检测器：它检测的是一般物质均具有的性质，属于这类检测器的有示差折光，蒸发光散射检测器等。 （l）紫外检测器 特点灵敏度高，要求试样必须有紫外吸收，而且溶剂必须能透过所选波长的光。 分为可变波长检测器 光电二极管阵列检测器 用光电二极管阵列检测器可获得组分的吸收光谱，经计算机处理后，将每个组分的吸收光谱和试样的色谱图结合在一张三维坐标图上，而获得三维光谱色谱图。吸收光谱用于定性，色谱面积用于定量。 （2）荧光检测器：