六株家蚕病原菌的分类鉴定及其致病力的初步分析-classification and identification of six silkworm pathogenic bacteria and preliminary analysis of their pathogenicity.docxVIP

江苏科技大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 本学位论文属于： (1)保密□，在 年解密后适用本授权书。 (2)不保密□。 学位论文作者签名： 指导教师签名： 年 月 日 年 月 日 摘 摘 要 - -I- 摘 要 蚕病为害是养蚕生产上主要的不稳定因素，直接影响养蚕的收成、蚕茧的产量及 茧丝的品质。蚕病种类较多，通常按致病的原因可分传染性和非传染性两大类。传染 性蚕病由细菌、真菌、病毒和原虫等病原微生物引起。 家蚕细菌病是常见的蚕病，一般春蚕少，夏秋蚕高温多湿季节发生较多。其种类 较多，大多由于寄生细菌的迅速繁殖，蚕尸随之软化腐烂，故通称为软化病。根据其 病原及病症，可分为卒倒病、败血病、细菌性肠道病等。 家蚕真菌病是由病原菌经皮侵入蚕体而引起的，除曲霉病外，家蚕发病毙死后， 尸体有硬化现象，因此真菌病习惯上叫硬化病或僵病，在多湿地区和多湿季节发病较 多。家蚕真菌病种类很多，其中以白僵病、黄僵病的危害最为严重。由于黄僵菌和球 孢白僵菌在形态上的差异极小，多数学者认为黄僵菌与球孢白僵菌（ Beauveria bassiana）同属同种，只是血清型不同，但并不明确[1]。 本研究从自然发生的病蚕中分离获得 4 株病原细菌(分别暂命名为 SY-1、ZJ-1、 ZJ-2 和 DT-1)，对各菌株的形态、生理生化特征和分子指标进行鉴定，确定其具体的 属和种。 细菌学实验结果表明：4 株病原细菌均为革兰氏阴性菌，细胞呈短杆状，直形， 两端钝圆，周身 HYPERLINK /kns50/XSearch.aspx?KeyWord=%e9%9e%ad%e6%af%9b 鞭毛，能 HYPERLINK /kns50/XSearch.aspx?KeyWord=%e8%bf%90%e5%8a%a8 运动。但菌落形态、生理生化指标等差异显著。16S rRNA 基 因序列分析及生理生化实验结果表明：SY-1 为一株雷氏普罗威登斯菌，这是首次发现 该菌能引起家蚕患败血病的案例；ZJ-1 和 ZJ-2 与黏质沙雷氏菌相似性均达 99%以上， 通过 48h 相同条件下常规培养，随着培养温度(25℃、30℃、37℃)的升高，ZJ-2 菌株 菌落的颜色始终较 ZJ-1 菌株菌落红色深，ZJ-2 菌株在 37℃还表现出一定程度的红色， 而 ZJ-1 菌株在 37℃时几乎看不到红色，说明温度对这 2 株菌株灵红素的产生都有影响， 但不同菌株之间受影响的程度不同。除此之外，二者典型生理生化现象也有诸多不同， 如 ZJ-2 能够利用丙二酸盐，柠檬酸盐利用现象为产酸、V-P 反应阴性等。最终确定 ZJ-1 为一株黏质沙雷氏菌的分离株，ZJ-2 为一株新的黏质沙雷氏菌亚种；DT-1 经鉴定也为 一株沙雷氏菌属的分离菌株，但不产生红色素，排除是黏质沙雷氏菌的可能性。以上 三株菌株对家蚕的致病力不同，具体表现为 ZJ-2 DT-1ZJ-1。这三株细菌的鉴定证明 了黏质沙雷氏菌不是沙雷氏菌属唯一的昆虫致病菌，证明不同的黏质沙雷氏菌菌株产 生色素的能力有差异，为高色素产量菌株的选育及对该色素开发利用奠定基础，同时 也表明感染家蚕患败血病的沙雷氏菌具有多样性。 本研究从自然发生的患黄僵病病蚕中分离获得 2 株黄僵病病原菌(分别暂命名为 江苏科 江苏科技大学理学硕士学位论文 -II -II- STH2、STH3)，通过形态、生理学和分子生物学等多个方面与球孢白僵菌株 SHB 进行 比对，以确定它们是否为同属同种病原真菌。 STH2 和 STH3 与 SHB 比对结果表明：孢子颜色不同，产孢量差异极显著。但孢 子大小基本一致，菌丝生长速率基本相同，18S、28S，核糖体内转录间隔区 ITS 序列 相似性近乎 100%，因此，在分子生物学水平，可认定二者为同属同种。 本文从形态、生理生化、分子生物学角度全面分析鉴定了 4 株家蚕病原细菌和 2 株黄僵病病原菌。首次发现雷氏普罗威登斯菌可感染家蚕引起败血病；发现了黏质沙 雷氏菌不是沙雷氏菌属的唯一病原菌，表明了感染家蚕患败血病的沙雷氏菌具有多样 性；证明了家蚕黄僵病病原菌属于球孢白僵菌属。本研究结果为家蚕病理学及微生物 生态学研究积累了一定的基础，对家蚕细菌病、真菌病的诊断和治疗提供科学依据。 关键词：家蚕；败血病；僵病；分子鉴定 Abst Abstract - - PAGE VII- Abstract Harm of silkworm diseases are major