骨髓间充质干细胞诱导分化为肝样细胞研究进展.docVIP

骨髓间充质干细胞诱导分化为肝样细胞研究进展 　　owen[1]首先将其命名为间充质干细胞（BM-MSCs)，最初认为它只能分化为同胚层的细胞，后来研究证实其分化潜能是超越胚层界限的。BM-MSCs属于多能干细胞，来源于中胚层，具有很强的多向分化潜能，具有干细胞的共性[2-3]。对BM-MSCs分化潜能的研究已成为国内外研究机构的热点。目前BM-MSCs向肝细胞的分化已有研究，但仍处于初步阶段。本文就BM-MSCs体外诱导分化为肝细胞的研究进展作一综述。 　　1 BM-MSCs的生物学特性 　　1.1 BM-MSCs的来源及形态 　　BM-MSCs从骨髓、脂肪组织、骨骼肌、成人外周血、血管周皮细胞、妊娠4-6个月羊水、胎儿的血和真皮组织、脐血中都可以分离得到间充质干细胞[4]，其中对BM-MSCs研究最充分最彻底。BM-MSCs表现出早期细胞的特点，呈均一的成纤维细胞形态，染色质疏松，核仁明显，核浆比例大，辐射状或漩涡状排列，可聚集成均匀的集落。 　　1.2 BM-MSCs的鉴定 　　鉴定BM-MSCs目前没有特异性的表型标志，研究从形态、表型及多分化功能来鉴定体外分离培养的BM-MSCs [5-6]，纯化的BM-MSCs表现为成纤维细胞梭形贴壁细胞，呈漩涡状、平行状或鱼群状生长； BM-MSCs的抗原表型，流式细胞仪检测不表达造血细胞CD14、CD34、CD45的标志，表达CD29、CD44、CD73、CD90、CDl06、CDl24、SH-2、SH-3、SH-3等；BM-MSCs具有跨胚层的多向分化，如成骨、成软骨、成脂肪，是BM-MSCs作为干细胞最基本特征[7]。故BM-MSCs常通过负性筛选和细胞多向分化，鉴定BM-MSCs。 　　1.3 BM-MSCs的分离培养 　　BM-MSCs在骨髓中含量很少，生理状态下20％为静止期细胞，所以BM-MSCs要应用于临床，其分离培养显得尤其重要。目前分离获取BM-MSCs的方法主要有4种[8-9]：全骨髓差异贴壁法、免疫磁珠法、密度梯度离心法、流式细胞仪分离法。全骨髓差异贴壁法获取BM-MSCs，操作简单，保存了骨髓环境中丰富的粘附分子和各种生长因子的营养作用及其他细胞成分的支持作用，通过换液去除非贴壁的血细胞和造血细胞，提高了原代培养的成功率。免疫磁珠法和流式细胞仪分离法分选程度高，但需联合多个表面标志，且分选过程中对细胞的生物活性影响较大。密度梯度离心法根据骨髓细胞成分的密度???同，应用Ficoll或淋巴细胞分离液Percoll进行分离BM-MSCs，但分离液对细胞都有一定的毒性作用，造成细胞损伤，影响细胞的活性，使BM-MSCs培养困难。采用全骨髓差异贴壁法分离培养BM-MSCs，第一代纯化可以达到92％，第二代纯化超过96％[10]。 　　2 BM-MSCs诱导分化为肝样细胞的实验研究 　　骨髓干细胞研究的升温，其替代或作为过渡肝移植、肝细胞移植、肝干细胞移植治疗终末期肝脏疾病越来越成为可能。目前，国内外众多机构对体内、外骨髓干细胞向肝细胞的横向分化做了大量的工作，使干细胞移植成为基础和临床研究的热点。 　　2.1 BM-MSCs体内诱导分化为肝样细胞的研究 　　自从Petersen等[11]报道大鼠骨髓中的某个细胞群体具有分化为肝样细胞和胆管上皮细胞的潜能。这一结果提示，根据干细胞所处微环境的不同，其分化方向亦有较大的可塑性。有研究报道BM-MSCs是应激状态下肝再生细胞的主要肝外来源[12]。Theise等[13]将雌性小鼠给予致死量放射线照射，并将雄性小鼠的骨髓移植到该雌性小鼠体内，实验结果发现在雌性小鼠肝脏有部分细胞表达Y染色体同时表达肝细胞标志ALBmRNA，认为移植的骨髓干细胞在小鼠中能分化为肝样细胞。动物肝损伤后其体内产生大量对肝细胞生长有利的因子，利用这一特殊内环境对BM-MSCs进行诱导分化。Terai等[14]首先建立CCL4诱导的小鼠肝硬化模型，然后从尾静脉注入lxl05个经绿色荧光蛋白(GFP)标记的BM-MSCs，4周后肝脏中有25％的细胞是BM-MSCs，并横向分化为能分泌ALB的肝样细胞。AvitaI等[15]采用免疫磁珠分离法从大鼠和人骨髓中分离出β2-m-/Thy-1+细胞，这些细胞同时表达其他肝细胞特异性标志物ALB、AFP、CK-18。Yukiko Saji[16]等鉴定了在肝损伤小鼠模型体内碱性成纤维生长因子能促进BM-MSCs分化为肝样细胞，并且提高了ALB的表达，且能在增殖过程中保留BM-MSCs的多向分化潜能。 　　2.2 BM-MSCs体外诱导分化为肝样细胞的研究 　　研究表明骨髓干细胞在体外能诱导分化为肝系细胞，调控肝再生的细胞因子包括：肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤