基因工程中“限制性核酸内切酶”和“DNA连接酶”疑难辨析.docVIP

基因工程中“限制性核酸内切酶”和“DNA连接酶”疑难辨析 　　限制性核酸内切酶和DNA连接酶是基因操作的重要工具，在平时练习和高考中经常出现。现将一些疑难易错问题总结如下。 　　■ 一、 两种酶共同点：二者都作用于磷酸二酯键，而不是氢键 　　■ 例1 DNA连接酶的功能是（ ） 　　A. 在子链与母链间形成氢键 　　B. 在黏性末端之间形成氢键 　　C. 将两DNA末端间的缝隙连接 　　D. A、B、C都对 　　■ 答案 C 　　■ 例2 下列说法错误的是（ ） 　　A. DNA连接酶将黏性末端的碱基连接起来 　　B. 限制性核酸内切酶可用于目的基因的获得 　　C. 目的基因须由运载体导入受体细胞 　　D. 人工合成目的基因不用限制性核酸内切酶 　　■ 答案 A 　　■ 例3 关于下图DNA分子片段的说法正确的是（ ） 　　 　　 　　 　　 　　A. 限制性核酸内切酶可作用于①部位，解旋酶作用于③部位 　　B. ②处的碱基缺失导致染色体结构变异 　　C. 把此DNA放在含15N的培养液中复制2代，子代中含15N的DNA占3/4 　　D. 该DNA的特异性表现在碱基种类和（A+T）/（G+C）的比例上 　　■ 解析 A项：图中①部位指单链上的磷酸二酯键，而③部位指两条链之间的氢键。限制性核酸内切酶作用于磷酸二酯键，而解旋酶作用于氢键。B项中DNA分子中碱基的增添、缺失或改变属于基因突变。C项原来DNA中的两条链一条是15N，一条是14N，根据DNA保留复制的特点，子代DNA应都含有15N。D项中DNA的特异性和碱基种类没有关系。 　　■ 答案 A 　　■ 二、 限制性核酸内切酶有特异性，而DNA连接酶没有特异性 　　一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且在特定的位点上切割DNA分子。DNA连接酶不能特异性识别，只要是断开的DNA链都可以连接。 　　■ 例4 下列关于生物技术的叙述中，不正确的是（ ） 　　A. DNA连接酶能特异性识别黏性末端从而将切割位点连接起来 　　B. 植物体细胞杂交过程中得到的杂种细胞具有连续分裂并分化形成完整植株的潜能 　　C. 单克隆抗体制备时需要利用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞 　　D. 微生物培养中可以利用以尿素为唯一碳源的培养基筛选出能分解尿??的细菌 　　■ 解析 A项中DNA连接酶不能“特异性识别”。 　　■ 答案 A 　　■ 三、 根据黏性末端判断所用限制性核酸内切酶的种类 　　■ 例5 下列黏性末端属于同一种限制性核酸内切酶切割而成的是（ ） 　　 　　 　　 　　 　　A. ①② B. ①③ 　　C. ①④ D. ②③ 　　解析 如果是同一种限制性核酸内切酶切割而成的，则应具有相同的黏性末端。 　　■ 答案 B 　　■ 例6 下列所示的黏性末端是由几种限制性核酸内切酶作用产生的（ ） 　　 　　 　　 　　A. 1种 B. 2种 　　C. 3种 D. 4种 　　■ 解析 把每个黏性末端的另一个部分补回，如 　　■ 补回后，变成■ 从而知道这种限制性核酸内切酶识别的序列为：GAATTC。 　　G CTTAAG 　　如此类推，4个黏性末端的原识别序列为：GAATTC、CAATTG、GTTAAC、CTTAAG。序列不同，由于每种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的碱基序列，所以应由4种不同的限制性核酸内切酶来切割。 　　■ 答案 D 　　■ 四、 两种不同限制性核酸内切酶切割后所形成的黏性末端也可以在DNA连接酶的作用下连接起来 　　基因工程常用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒，因为这样目的基因和质粒就会带有相同的黏性末端。如果用两种不同的限制性核酸内切酶来切目的基因和质粒也可以，只要保证切割后能产生相同的黏性末端就可以在DNA连接酶的作用下连接起来。 　　■ 例7 在基因工程的基本步骤中，若以质粒为运载体，为使目的基因和运载体结合，则要求对目的基因和运载体所用的限制性核酸内切酶和切口必备的特点是（ ） 　　A. 可用不同的限制性核酸内切酶，但露出的黏性末端必须相同 　　B. 必须用相同的限制性核酸内切酶，露出的黏性末端可不相同 　　C. 必须用相同的限制性核酸内切酶，露出相同的黏性末端 　　D. 可用不同的限制性核酸内切酶，露出不同的黏性末端 　　■ 答案 A 　　■ 例8 下面是4种限制性核酸内切酶所识别的DNA分子序列和剪切位点图（↓表示剪切点、切出的断面为黏性末端） 　　限制性核酸内切酶1：――↓GATC―― 　　限制性核酸内切酶2：――CATG↓――； 　　限制性核酸内切酶3：――G↓GATCC―― 　　限制性核酸内切