(仪器分析）13.2分子荧光分析法教程文件.pptVIP

第十三章 分子发光分析法 13.2.1 仪器与结构流程 13.2.2 荧光分析方法与应用 第二节 分子荧光分析法 Molecular luminescence analysis Molecular fluorescence analysis 一、仪器与结构流程 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 基本流程图： 单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器。 光源：灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区)。 检测器：光电倍增管。 仪器光路图 仪器框图 该型仪器可进行荧光、磷光和发光分析。 同步扫描技术 根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系，同步扫描可分为固定波长差()和固定能量差及可变波长三种。 同步扫描技术可简化光谱。谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率。 合适的可减少光谱重叠。酪氨酸和色氨酸的荧光激发光谱相似，发射光谱严重重叠，但15 nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； 60 nm时，只显示色氨酸的特征光谱，实现分别测定。 2.定量依据与方法 (1) 定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率 ： If =  Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10- l c ) If =  I0(1-10- l c ) =  I0(1-e-2.3 l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3  I0  l c = Kc （2）定量方法 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样，测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 3.荧光分析法的应用 (1)无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量；可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定。 (2)生物与有机化合物的分析 见表。 内容选择 结束 13.1 分子荧光与磷光分析原理 13.2 分子荧光分析法 13.3 分子磷光分析法 13.4 化学发光分析