(食品微生物)第一节 病毒宣讲培训.pptVIP

* 食品学院 王丽 ?????????????????????????????????????????????????????? 抗病毒 转CMV CP基因辣椒 田间试验结果 上：转基因辣椒 下：对照 * 食品学院 王丽 在人类、哺乳动物、禽类、两栖类、爬行类和鱼类等各种脊椎动物中，广泛存在着相应的病毒。 与人类健康有关的病毒超过300种，与其他脊椎动物有关的病毒超过900种。 （三） 人类和脊椎动物病毒 * 食品学院 王丽 1.常见的病毒病 Eg.流行性感冒 肝炎 麻疹 腮腺炎 脊髓灰质炎 疱疹 流行性乙型脑炎 狂犬病 艾滋病等 * 食品学院 王丽 2.肿瘤 在人类的恶性肿瘤中，约有15％~20%是由于病毒的感染而诱发的。 1933年理查德·毕肖普（Richard Bishope）发现了第一个DNA肿瘤病毒即兔乳头瘤病毒。 * 食品学院 王丽 1953年路德维克 · 格罗斯（Ludwik Gross）等分离到一种能引起多类组织（腮腺、肾、骨、乳腺）发生肿瘤的病毒，称之为多瘤病毒。这种多瘤病毒不仅可引起小鼠和田鼠患肿瘤，还可引起兔、海猪、黄鼠狼等动物患肿瘤。 * 食品学院 王丽 SV40是实验室常用作研究分子病毒学的重要工具，它是在用猴肾细胞培养制备脊髓灰质炎疫苗时发现的。 1960年又从猴肾细胞中找到一种猴空泡病毒40（SV40）。 * 食品学院 王丽 研究表明，至少有3种病毒与人类肿瘤的密切关系。 肝炎病毒（HBV、HCV）与肝细胞癌； 爱泼斯坦－巴尔病毒（EBV）与伯基特（Burkitt）淋巴瘤、鼻咽癌； 人乳头瘤病毒（HPV）与宫颈癌。 * 食品学院 王丽 1980年曾发现人类嗜T细胞病毒（HTLV）与人类某些淋巴细胞性白血病的关系，使人类肿瘤病毒病因学获得巨大突破。 白血病患者血液中的癌细胞（三个颜色深的） * 食品学院 王丽 在涂布有敏感宿主细胞的固体培养基表面，若接种上相应噬菌体的稀释液，则在菌苔上形成一个具有一定形状、大小、边缘和透明度噬菌斑（负菌落）。 2. 噬菌体效价的测定 噬菌体的鉴定指标， 纯种分离和计数。 * 食品学院 王丽 效价（titre titer）：表示每毫升试样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数，又称噬菌斑形成单位数（plaque-forming unit，pfu）或感染中心数（infective centre）。 * 食品学院 王丽 较常用且较精确的测定效价的方法称为双层平板法（two layer plating method） * 食品学院 王丽 双层平板法 底层平板（2％琼脂培养基10mL） 上层平板 上层培养基（1％琼脂培养基5mL） 宿主菌悬液（对数期菌液0.2mL） 噬菌体试样（合适稀释液0.1mL） 混匀 37℃ 10余h 计数噬菌斑 * 食品学院 王丽 * 食品学院 王丽 双层平板法主要有以下几个优点： ①加了底层培养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥补； ②所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，因此不仅每一噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不致发生上下噬菌斑的重叠现象； ③因上层培养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计数。 * 食品学院 王丽 3. 一步生长曲线（one step growth curve） 定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，称作 一步生长曲线或一级生长曲线（one-stepgrowthcurve）。 反映每种噬菌体的三个最重要的特性参数 潜伏期（latentphase） 裂解期（risephase） 裂解量（burstsize） * 食品学院 王丽 * 食品学院 王丽 指噬菌体的核酸侵入宿主细胞后至第一个噬菌体粒子装配前的一段时间。 （1）潜伏期（latentphase） 整段潜伏期中 没有一个成熟的噬菌体粒子 从细胞中释放出来 * 食品学院 王丽 潜伏期又可分两段： ①隐晦期（eclipsephase） 指在潜伏期前期人为地（用氯仿）裂解细胞，裂解液仍无侵染性的一段时间。 细胞内正处于复制噬菌体核酸和 合成其蛋白质衣壳的阶段 * 食品学院 王丽 ②胞内累积期（intracellularaccumulationphase） 又称潜伏后期，在隐晦期后，如人为地裂解细胞，其裂解液出现侵染性的一段时间。 噬菌体开始装配的时期， 在电镜下可观察到已初步装配好的噬菌体粒子。 * 食品学院 王丽 （2）裂解期（risephase） 紧接在潜伏期后的一段宿主细胞迅速裂解、溶液中噬菌体粒子急剧增多的一段时间。 （3）平稳期（plateau） 指感染后的宿