耳蜗谷氨酸兴奋性毒性及谷氨酸谷氨酰胺循环机制的分析-analysis of excitotoxicity of glutamate in cochlea and its circulating mechanism.docxVIP

军医进修学院硕士论文缩略词表NIHLnoise_inducedhearingloss噪声性听力损失CMcochlearmicmDhonics耳蜗微音电位CAPcompoulldactionpotential听神经复合动作电位Glu￡lutamate谷氨酸G1nglutamine谷氨酰胺ABRauditorvbminstemresDonse听性脑干反应DPOAEdistortionDroductotoacoustic畸变产物耳声发射emissionIHC(s1innerhaircellfsl内毛细胞OHCfs)outerhaircellfs、外毛细胞GLAST91utamate-aspanatetrallsporter谷氨酸-天冬氨酸转运体GSglutaminesvr曲etase谷氨酰胺合成酶PAGphosphate-activatedglut锄inase磷酸激活的谷氨酰胺酶NMDAN．metllvl一D．asDanateN．甲基．D．天冬氨酸AMPAalpha．amino．3_hydroxy一5-methyl-4一iⅡ-氨基一3-羟基·5-甲基一4一soxaz01epmpionate异嗯唑丙酸KAkainate海人藻酸HPLChi曲perfornlance1iquid高效液相色谱法chmmatographyANauditoryneuropamy听神经病APLanificialperilymph人工外淋巴液巳盥Q兰!：!：ii堕堡19旦啦兰型i望!：!：j：ii!些!：!：三塑茎堕嘿堕：!：!：三墅军医进修学院硕士论文耳蜗谷氨酸兴奋性毒性及谷氨酸一谷氨酰胺循环机制的研究摘要摘要谷氨酸作为耳蜗中主要的兴奋性传入神经递质，由内毛细胞释放至内毛细胞与I型螺旋神经形成的突触间隙，过度释放的谷氨酸堆积在突触间隙可以产生兴奋性毒性，引起突触后渗透压失衡、ca2+超载等一系列功能和形态学的改变。有报告在噪声暴露时，内毛细胞及传入神经纤维的损伤与灌流谷氮酸受体激动剂所致的耳蜗病理变化相类似，因此推测噪声引起的耳蜗病理改变与传入神经递质谷氨酸在耳蜗中的堆积有关。同时耳蜗中存在强有力的谷氨酸摄取系统——谷氨酸一谷氨酰胺循环。谷氮酸由内毛细胞释放到突触州隙中，被支持细胞膜上的谷氨酸一天冬氨酸转运体转运进入支持细胞，在谷氨酰胺合成酶作用下转变为谷氨酰胺并被释放到细胞外。内毛细胞摄取谷氨酰胺，在磷酸激活的谷氨酰胺酶作用下又重新形成谷氨酸，完成循环。因此这一循环机制中的谷氨酰胺合成酶在保护噪声引起的听力损失中起着重要的作用。本研究分为i个部分。、探讨全耳蜗灌流不同浓度的谷氨酸对耳蜗电位的影响；谷氨酸对有重要临床意义的DPOAE、ABR的影响和其所引起的耳蜗形态学的改变。杂色豚鼠50只，随机分为5组，每组10只：(1)人工外淋巴液组；(2)1mmol几谷氨酸组：(3)10mmol／L谷氨酸组；(4)20mm01／L谷氨酸组；以上4组监测灌流前、后cM和cAP。(5)10mmol／L谷氨酸组，监测灌流前、后DPOAE和ABR，并用透射电镜观察耳蜗形态学的变化。用stata4．0统计软件进行统计分析。组问比较CAP的闽移用单因素方差分析，组内比较DPOAE的变化用秩和检验，组内比较ABR的变化用配对t检验。结果显示：(1)耳蜗灌流不同浓度的谷氨酸后cM幅度虽有下降、但是其输入，输出函数曲线仍保持非线性特点，同时cAP阈值明显升高；并且随着谷氨酸浓度的增加cM幅度愈低、CAP闽值愈高。(2)灌流谷氨酸对DPOAE的幅度没有影响；但是可以导致ABR潜伏期延长、幅度下降，甚至无法引出；形态学结果显示内毛细胞及其下方2军医进修学院硕士论文耳蜗谷氨酸兴奋性毒性及谷氨酸一谷氨酰胺循环机制的研究摘要传入神经纤维空泡形成，外毛细胞无改变。结果表明：外源性谷氨酸选择性作用于耳蜗内毛细胞及传入神经系统，引起相应的功能和形态学的改变，并且谷氨酸浓度与耳蜗功能之间存在量效关系；外源性谷氨酸行全耳蜗灌流可以建立听神经病的动物模型。二、探讨噪声暴露后耳蜗外淋巴液中谷氨酸的含量以及噪声暴露对耳蜗功能和形态学的影响。选用健康杂色豚鼠10只，以右耳为噪声暴露耳；以左耳为对照耳，在手术显微镜下破坏豚鼠的左耳鼓膜，并用调制好的磷酸锌牙科水泥堵塞左侧外耳道，建立单侧耳蜗噪声损害的动物模型。采用配对t．检验比较噪声暴露耳与对照耳外淋巴液中谷氨酸的含量，及噪声暴露耳噪声暴露前、后cAP的阈值。结果显示：(1)应用高效液相色谱法测定外淋巴液中谷氨酸的含量，噪声暴露耳谷氨酸含量明显增加。(2)噪声暴露引起CM幅度下降并且其非线性特点消失，cAP闽值明显升高。(3)噪声暴露后内毛细胞及其F方传入神经纤维空化，外毛细胞中空泡形成。结果表明：噪声暴露不仅引起外毛细胞的损伤，还可以引起内毛细胞及传入神经纤维的损伤；噪