番茄花药和小孢子离体培养及转化雄性不育基因barnase的分析-analysis of anther and microspore culture in vitro and transformation of male sterile gene barna se in tomato.docxVIP

主要英文缩略词表英文缩写英文全称中文名称6-BA6-Benzylaminopurine6-苄基氨基嘌呤2,4-DAmpAPSBSACbCef2,4-dichlorophexoxyaceticacidAmpicillinAmmoniumpersulfatebovineserumalbuminCarbencillinCefotaxime2,4二氯苯氧乙酸氨苄青霉素过硫酸氨牛血清白蛋白羧苄青霉素头孢霉素DHDoubledHapliod双单倍体dNTPdeoxyribonucleosidetrephosphate脱氧核苷三磷酸EBEthidiumbromide溴化乙锭E．coliEscherichiacoli埃希氏大肠杆菌EDTAethylenediaminetetraceticacid乙二胺四乙酸GenGentamicin庆大霉素IAAIndole-3-AceticAcid3-吲哚乙酸IBAIndole-3-butyric吲哚丁酸IPTGisopropythis-α-D-galactoside异丙基硫代-α-D-半乳糖苷KanKanamycin卡那霉素KD(a)kilodalton千道尔顿KTKinetin激动素LxLux勒克司MSMurashigeandSkllgmedium怀特培养基NAAα-naphthaleneaceticacidα-萘乙酸PCRpolymerasechainreaction聚合酶链式反应RifRifampicin利福平RNaseribonucleicacidenzyme核糖核酸酶rpmrotationperminute每分钟转速TAETris（hydroxymethyl）aminomethaneethacidTris-乙酸TaqDNAaseTaqDNApolymeraseTaqDNA聚合酶Trishydroxymethylaminomethans三羟甲基氨基甲烷X-gal5-broma-4-chloro-3-indoly-α-D-galactoside5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷W/VWeight/Volume（concentration）重量/容积（浓度）引言番茄(LycopersiconesculentumMill)属于茄科番茄属，别名西红柿、洋柿子。果实营养丰富，具有特殊风味。番茄是全世界栽培最为普遍的果菜之一。中国各地也普遍种植，栽培面积仍在继续扩大。从目前形势和研究热点来看，番茄种质资源创新研究十分重要。番茄花药培养和游离小孢子培养技术既可充分利用植物的种质资源，又可以获得纯系。在育种上用花药培养和游离小孢子培养产生单倍体，通过对单倍体进行染色体加倍，可以克服杂种性状的分离，有助于提高育种效率，快速获得纯化番茄品系。它们可直接用于新品种的培育或作为优良亲本间接用于品种的改良，进而大大缩短育种年限；从分子生物学角度看，因双单倍体（DH）群体在遗传上是纯合的，可避免二倍体由于来自双亲的两条染色体在碱基序列的细小差异，从而显著提高了基因定位作图的准确性，因此是进行RAPD、AFLP、SSR等分子标记和基因图谱研究的理想材料。由此可知，番茄花药离体培养与游离小孢子培养对番茄的遗传育种理论和实践都具有十分重要的作用。目前，利用杂种优势大幅度提高作物产量取得了巨大的成就，以植物雄性不育为基础的杂种优势利用，已成为许多作物的育种目标。番茄是自花授粉作物，杂种优势很明显，番茄雄性不育的研究对于番茄杂交育种具有十分重要的意义。在1945年，番茄雄性不育在生产中就得到了应用。对于雄性不育材料的选育，保加利亚在20世纪50年代就有这方面的报道，并于60年代开展了番茄杂种优势利用的工作。但是，传统雄性不育的育种存在着周期长，选择效率低等问题，不能得到广泛的利用。近年来，随着基因工程技术在农业中的广泛应用以及雄性不育生理学和细胞生物学的深入研究，发现发育异常的绒毡层可导致花粉败育，这为杂种优势的利用开辟了一条崭新的途径。以Barnase为细胞毒素基因创造的工程雄性不育系越来越多。雄性不育基因Barnase是一种嵌合的细胞核编码的RNA酶基因，它通过阻遏花药绒毡层形成而达到使花粉败育的目的，因而此基因自发现之日起就受到广大育种家的普遍青睐。最早在烟草上，通过利用基因工程技术获得了具有雄性不育特征的烟草。在番茄上，虽然已有雄性不育转化方面的报道，但研究不完善，与实际应用相差甚远。本实验旨在通过对影响番茄花药培养与游离小孢子培养的因素进行系统性研究，以期进一步优化番茄花药培养与游离小孢子培养体系，提高胚状体诱导率和成苗率，为建立高效的番茄花药培养与游离小孢子培养技术体系打下良好的基础；同时，本实验鉴于雄性不育基因Barnase在番茄杂种优势应用上的潜力与优势，通过农杆菌介导法对烟草、番茄进行Barnase基因转化，