干扰小分子蛋白sulfiredoxin-1对大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤影响的初步研究-preliminary study on the effect of interfering small molecular protein sulfiredoxin - 1 on oxidative stress damage of rat astrocytes.docxVIP

英汉缩略语名词对照英文缩写英文名称中文名称Srxn1Sulfiredoxin-1硫氧还蛋白-1OGDoxygen-glucose deprivation氧糖剥夺SD ratSprague-Dawley rat斯普拉格-道利大鼠CNScentral nervous system中枢神经系统FBSfetal bovine serum胎牛血清DMEM/F12Dulbecco’s modified Eagle’s medium/F12细胞培养基GFAPglia fibrillary acidic protein胶质纤维酸性蛋白shRNAshort hairpin RNA小发夹 RNAsh-Srxn1short hairpin Srxn1小发夹 Srxn1 干扰片段NCnegative control阴性载体对照组P-L-LPoly(L-lysine)左旋多聚赖氨酸PBSphosphate buffered saline磷酸盐缓冲液WBWestern blot蛋白免疫印迹BCAbicinchoninic acid二喹啉甲酸APAmmonium persulfate过硫酸铵TEMEDtetramethylethylenediamine四甲基乙二胺TBSTTween 20% Tris buffered saline吐温 20%Tris 盐缓冲液 TrisTris hydroxymethyl amino methane三羟甲基氨基甲烷 PVDFpolyvinylidene difluoride聚偏(二)氟乙烯SDSsodium dodecyl sulphate钠十二烷基硫酸盐PAGEpolyacrylamide gel聚丙烯酰胺凝胶hhour小时mRNAMessage ribonucleic acid信使核糖核酸TaqTaq Thermos aquaticus (DNA polymerase)耐热 DNA 聚合酶1RT-PCRReverse transcription PCR逆转录聚合酶链反应cDNA QPCRLDHcomplementary DNA real-time quantitative PCRLactate dehydrogenase互补脱氧核糖核酸实时定量聚合酶链反应 乳酸脱氢酶2干扰小分子蛋白 Sulfiredoxin-1 对大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤影响的初步研究 摘要背景： 脑卒中等脑缺血性脑血管疾病发病率、致残率与死亡率一直居高不下，给社会及家庭造成严重的负担。脑缺血再灌注损伤使机体产生 氧化应激，造成机体活性氧的释放，使机体的内源性抗氧化防御系统 清除能力的平衡失调。星形胶质细胞的损伤在脑缺血疾病中起着至关 重要的作用。小分子蛋白 Sulfiredoxin-1(Srxn1), 属于内源性保守的 Sulfiredoxin 抗氧化家族的成员，具有重要的神经保护作用，可能与抗 氧化、抗凋亡以及抗炎症等作用有关。本课题拟采用慢病毒载体干扰Srxn1基因表达，在体外以OGD诱导 大鼠星形胶质细胞氧化应激损伤来模拟脑缺血再灌注，初步探讨干扰 Sulfiredoxin-1对OGD诱导的星形胶质细胞氧化应激损伤的影响。目的：初步探讨干扰 Sulfiredoxin-1 对 OGD 诱导的星形胶质细胞氧化应 激损伤的影响。方法：（1）筛选氧糖剥夺（OGD）最佳时间，用不同时间的 OGD（0 h，国家自然科学基金资助（No,和32 h，4 h，6 h，8 h），复氧 24 h，作用于星形胶质细胞，运用 MTS和 LDH 检测筛选出最佳 OGD 作用时间。（2）构建三条小发夹 Srxn1 干扰慢病毒载体（shRNA-Srxn1 –LV3 298，shRNA-Srxn1 –LV3 385，shRNA-Srxn1 –LV3 456）及一条阴性载 体（LV3 NC），运用慢病毒感染技术将各个载体瞬时转染至星形胶质 细胞中，倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率，运用 Western blot 和 QPCR 检测干扰效率，筛选出最佳干扰载体。（3）运用筛选出的最佳 OGD 时间作用于转染后的细胞以模拟氧 化应激损伤模型。运用 MTS 和 LDH 测定细胞的活性和损伤程度。（4）建立完整的 Srxn1 干扰的星形胶质细胞损伤模型，并运用Western blot 检测 Srxn1 的蛋白水平，QPCR 检测 Srxn1 的 mRNA 水平。 结果：（1）MTS 和 LDH 显示，OGD 6 h/复氧 24 h 为最佳的氧化应激 模型。（2）倒置荧光显微镜观察结果显示，慢病毒瞬时感染大鼠星形胶 质细胞效果显著，其转染效率可达到 85%以上。（3）Western blot 和 QPCR 检测结果显示，