猪瘟传染病实验猪伪狂犬病的实验室诊断.pptx [自动保存的]教材课程.pptxVIP

猪伪狂犬病的实验室诊断猪伪狂犬病临床症状 神经症状 死胎猪伪狂犬病剖检病变淋巴结肿大 肺部病变 肝脏白色坏死灶伪狂犬病的实验室诊断病毒的分离培养抗原的检测特异性免疫荧光诊断法实验内容中和抗体的检测：灵敏、假阳性少乳胶凝集试验测定抗体特异性抗体的检测胶体金：猪伪狂犬病抗体检测卡ELISA诊断方法实验目的：熟悉伪狂犬病的实验室诊断方法 病毒的分离培养（一）材料采取：发热期的中脑、桥脑及延脑，活病患部的水肿液、侵入部神 经干及脊髓病料处理：用培养液制成1：10组织悬液，离心沉淀，取上清液接种动物：皮下、肌肉和脑内接种家兔、大鼠等实验动物。家兔接种后 约36～48小时在接种部位发生典型的奇痒症状，维持几小时， 常于夜间死亡，从死兔口内可见有接种部位咬下的被毛；大 鼠接种后症状与家兔相似，口服时，可出现奇痒、唇部自残 症状，并归于死亡。特异性抗体检测（ELISA）原理 微孔反应板已包被有高纯度的猪伪狂犬病毒抗原，能与样本中的PRV-Ab结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成包被抗原+PRV-Ab+酶标抗猪IgG抗体复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。 显色深浅与PRV-Ab的量成正比，当样本反应显色后，经酶标仪检测所得结果超过设定的临界值时结果判为阳性，即表明免疫产生了抗体或有自然感染存在。ELISA步骤1.加样：取一根已包被抗原的板条（8孔），在第1、2孔中分别加入100ul阳性、阴性对照血清，3-8孔每孔分别加入100ul待检血清。2.温育：加样后，盖上盖板膜，置37 ±2 ℃温育30分钟。3.洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，无需静置，直接甩出，洗涤5次，最后一次洗涤后吸干板内液体。4.加酶：每孔加酶标记物100ul。5.温育：加好酶标记物的反应板盖好盖板膜，置37 ±2 ℃温育30分钟。6.洗板：同步骤3.7.显色：每孔加显色剂A、B各50ul，震荡混匀， 37 ±2 ℃避光反应15分钟。8.终止：每孔加终止液50ul，震荡10秒，充分混匀，终止后即读数。9.读数：以450nm/630nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。结果判定 在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的OD值≥0.6，阴性对照孔的OD值必须＜0.1；样品中抗体存在与否，或样品中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理： S/P=（样本OD450/630值-NCX）/(PCX-NCX) NCX:阴性对照孔的OD值 PCX :阳性对照孔的OD值当样本的S/P值≥0.25时判为阳性样本的S/P值＜0.25时判为阴性 样本中抗体相对水平—效价（ET），其与S/P的关系如下：Lg（ET的倒数）=0.7168X+2.1823X=S/P值 注：此效价是根据实验室目前对PRV检测方法和免疫的抗体反应两方面综合而定；在免疫时效检测和记录有代表性样本的抗体效价是对猪群的免疫状况的最好评价。1.妊娠母猪发生流产、产死胎、木乃伊胎，其中以产死胎为主2.伪狂犬病引起新生仔猪大量死亡3.引起断奶仔猪发病死亡，发病率在20％～40％，死亡率10％～20％，主要表现为神经症状、拉稀、呕吐等。4. 种猪不育症肺出血点 肺炎