三动物细胞制药part1.pptVIP

常用培养皿及清洗消毒 橡胶制品清洗 新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH 煮沸15分钟，流 水冲洗， 0.5mol/L HCl 煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮 沸2次，蒸馏水20分钟，50 ℃烤干备用。 塑料制品的清洗 塑料制品特点：质软、易出现划痕；耐磨蚀能力强、但不 耐热。 清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸入自来水中过 夜，用纱布或棉签和50℃清洗刷洗，流水冲洗，晾干，浸 于清洗液中15分钟，流水冲洗（15~20 遍），蒸馏水浸洗 三次，双蒸水中泡24小时，晾干备用。 Ⅴ环境和消毒 第63页/共88页 Ⅴ环境和消毒 消毒和灭菌 紫外线消毒 杀菌对象：紫外线可以杀死多种微生物。其中，革兰氏阴 性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的 抵抗力最强。 杀菌机制：紫外线是一种低能量的电磁辐射，直接作用是 通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用 是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。 使用范围：目前多用紫外线直接照射培养室进行消毒，用 法简单，效果好。 第64页/共88页 Ⅴ环境和消毒 消毒和灭菌 紫外线消毒 使用方法：紫外线的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射 剂量呈正相关，辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量 和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射 时间要适合离地面2米的30 w灯可照射9平方米房间，每天 照射2~3小时，期间可间隔30分钟。灯管离地面2米以外要 延长照射时间，2.5米照射效果较差。紫外灯照射工作台的 距离不应超过1.5米，照射时间30分钟为宜。 注意事项：紫外线不仅对皮肤、眼睛伤害，而且对培养细 胞与试剂等也产生不良影响，因此，不要开着紫外灯操 作。 第65页/共88页 Ⅴ环境和消毒 消毒和灭菌 高温湿热灭菌 杀菌机制：压力蒸汽灭菌时常用的高温湿热灭菌方法。对生物材料有良 好的穿透能力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡。 适用范围：布类，衣物玻璃器皿，金属器皿，橡胶和某些培养液都可以 用这方法灭菌。 使用方法：不同压力蒸汽所达到的温度不同，不同消毒物品所需的有效 消毒压力和时间不同。一般物品采用压力15lbf/in2 (121℃)， 维持15~30 分钟，培养液和橡胶类物品采用10lbf/in2 (115℃)，维持10分钟。 注意事项：从压力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品（不包括液体）， 应立即放到60~70℃烤箱内烘干，再贮存备用，否则，潮湿 的包装物品表面容易为微生物污染。 煮沸消毒也是常用的湿热消毒方法，他具有条件简单，使用方便等优点。 第66页/共88页 Ⅴ环境和消毒 消毒和灭菌 高温干热消毒 杀菌机制：干热灭菌主要是将电热烤箱物品加热到160℃以上，并保持 90~120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的。 适用范围：主要用于灭菌玻器皿（如体积大的烧杯、培养瓶）金属器皿 以及不能与蒸汽接触的物品（如粉剂、油剂）。 注意事项：干热灭菌后要关掉开关并使物品逐渐冷却后再打开，切忌立 即打开，以免温度骤变而使箱内的玻璃器皿破裂。干烤箱物 品间要有空隙，物品不要靠近加热装置。 烧灼也是灭菌方法之一，进行细胞培养，靠须利用台面上的酒精灯的火 焰队金属器皿及玻璃器皿口缘进行烧灼消毒。 第67页/共88页 Ⅴ环境和消毒 消毒和灭菌 过滤除菌 杀菌机制：是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细 菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。 适用范围：在体外培养时，过滤除菌大多数用于预热容易变性 而失败的试剂或培养液。 注意事项：目前，大多数实验室采用微孔滤膜除菌，关键步骤 是安装滤膜及无菌过滤过程。 第68页/共88页 Ⅴ环境和消毒 消毒和灭菌 化学消毒 新洁尔灭（苯扎溴铵），其0.1%水溶液可对器械、皮肤、操 作表面进行檫拭和浸泡消毒。 抗生素消毒 抗生素主要用于消毒培养液，是培养过程中预防微生物污染的 重要手段，也是微生物污染不严重时的“急救”方法。 不同抗生素杀灭微生物不同，应根据需要选择。 第69页/共88页 可用于细胞培养的消毒灭菌方法很多，但每种方法都有一定 的适应范围。 如常用的过滤除菌系统、紫外照射、电子杀菌灯、乳酸、甲 醛熏蒸等手段消毒实验室空气； 多用新洁尔灭消毒实验室地面； 常用干热、湿热消毒剂浸泡、紫外照射等方法消毒培养用器 皿； 采用高