rna干扰沉默lingo1基因对自身免疫性脑脊髓炎髓鞘修复的影响-effect of rna interference silencing lingo 1 gene on myelin sheath repair in autoimmune encephalomyelitis.docx

英文缩略词表英文缩写英文全名中文全名EAEExperimentalautoimmuneencephalomyelitis自身免疫性脑脊髓炎MSMultiplesclerosis多发性硬化FBSfetalbovineserum胎牛血清MBPmyelinbasalprotein髓鞘碱性蛋白Lingo-1LRRandIgdomain—containing，NogoReceptor—interactingprotein1含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域Nogo受体作用蛋白1MOImultiplicityofinfection感染复数ODOpticaldensity光密度LVLentivirus慢病毒bpBasepair碱基对cDNAComplementaryacidDeoxyribonucleic互补性酸脱氧核糖核酸CtCyclethreshold阈值循环数CNSCentralnervoussystem中枢神经系统DMEMDulbecco’smodifiedEagle’sMedium达尔伯克（氏）改良伊格尔（氏）培养基DMSODimethylSulphoxide二甲基亚砜dNTPDeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸ECLEnhancedchemiluminescence增强化学发光GFPGreenfluoreseeniprotein绿色荧光蛋白kbKilo-basepair千碱基对KDKilo-Dalton千道尔顿LFBLuxolfastblue固蓝LV/Lingo-1shRNALentiviralvectorsencodingLingo-1shRNA编码Lingo-1短发夹环RNA的慢病毒载体mRNAMessengerRNA信使核糖核酸MTT3-{4,5-dimehyl-2-thiazolyl}-2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromide甲基噻唑基四唑（噻唑蓝）mgMilligram毫克ngNanogram纳克mlMilliliter毫升TuTransducingunit转导单位OligoOligonucleotide寡聚核苷酸PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PCRPolymerasechainreaction聚合酶链反应PVDFPolyvinylidenefluoride聚偏氟乙烯RTqPCRReal-TimefluorescentquantitativePCR实时荧光定量PCRRISCRNA-inducedsilencingcomplexRNA诱导的沉默复合物RNARibonucleicacid核糖核酸RNAiRNAinterferenceRNA干扰rpmRollsperminute每分钟转数SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠shRNAshorthairpinRNA短发夹环RNATEMEDN,N,N’,N’-tetramethyl四甲基乙二胺TrisTris（hydroxymthyl）aminomethane三羟甲基氨基甲烷Eni.SEnhancedsolution病毒增强液ulugEGFHEMicroliterMicrogramEpidermalgrowthfactorHematoxylinandeosinstain微升微克表皮细胞生长因子苏木素-伊红染色全文摘要研究背景多发性硬化（MS）是中枢神经系统脱髓鞘性疾病，是青年人常见致残的神经系统疾病之一。髓鞘再生失败和轴突损害是MS患者遗留永久神经功能损害的病理基础，其中反复的髓鞘脱失可以导致轴突损伤。故尽快修复髓鞘，是防止轴突损害和减少残疾发生的关键。赖氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域（LeucinerichrepeatandIgdomaincontaining1，Lingo-1）是中枢神经系统成髓鞘细胞（少突胶质细胞）分化成熟的负性调控因子。EAE是目前公认的广泛应用于研究的多发性硬化动物模型。本研究通过RNA干扰抑制Lingo-1表达,观察Lingo-1抑制对少突胶质细胞和EAE的影响并探讨其机制，为下一步多发性硬化Lingo-1阻断治疗做一些有益的尝试。本研究分三部分。第一部分Lingo-1shRNA慢病毒载体的构建及筛选目的：筛选出对小鼠少突胶质细胞Lingo-1表达沉默效率较高的Lingo-1shRNA慢病毒载体。方法：1.体外原代培养少突胶质细胞，取材自新生48h内小鼠大脑皮质；应用不同分离纯化方法后测定细胞存活率和纯度，摸索较为理想的细胞获取方法；并进行Lingo-1、MBP免疫荧光鉴定。2.