肝x受体在小脑皮层发育中的作用及机制分析-role and mechanism of liver x receptor in cerebellar cortex development.docxVIP

肝 X 受体在小脑皮层发育中的作用及机制研究摘要小脑为具有典型的皮质板层结构的脑区。小脑的板层形成始于生后并于生后第三 周形成典型的三层结构，其中最外层为分子层，中间层为浦肯野细胞层，最内层为颗 粒细胞层。在板层形成过程中，小脑的颗粒细胞在不同发育时期定位在不同的区域。 小脑颗粒细胞的前体细胞在出生前主要集中在外颗粒层，随后通过放射状迁移由外而 内不断向内颗粒层迁移，至生后第三周，外颗粒层消失，形成小脑皮层的三层结构。 小脑颗粒细胞的放射状迁移是沿着贝克曼纤维完成的，这种贝克曼纤维是一种特殊的 放射状纤维。贝克曼胶质是小脑皮质中一种单极星形胶质细胞。在小脑生后发育过程中，为适 应颗粒神经元的迁移和分化贝克曼胶质细胞的形态需要经过一系列的变化：在小脑颗 粒神经元内迁过程中贝克曼胶质纤维扮演了“脚手架”的角色介导颗粒神经元的放射 状迁移，当颗粒神经元内迁过程完成以后，贝克曼胶质纤维回缩并逐步转化为成熟的 星形胶质细胞。贝克曼胶质与大脑皮质放射状胶质细胞的形态转变与功能极为相似。 由于小脑的皮质板层结构相对简单，因此更易于阐明板层发育模式的关键因素，并通 过对贝克曼胶质细胞发育与分化的调控研究解析大脑皮质发育中放射状胶质细胞发育 与分化的调控。核受体家族包括一系列转录因子，它们在结构上高度同源并由六个独立的功能结 构域构成。近年研究发现核受体家族成员分子在小脑发育中亦有重要作用，如雌激素 受体，睾丸受体等。肝 X 受体(1iver X receptor，LXR)，包括 LXRα和 LXRβ两型， 属于配体激活的转录因子家族。在胚胎 11.5 天时就检测到 LXRα和 LXRβ的表达， 并在 LXRs 基因敲除小鼠中证实内源性 LXRs 可促进中脑的神经发生，参与多巴胺神 经元的发育。此外，另一研究证实 LXRβ在大脑皮层的表达与发育时程密切相关，在 LXRβ基因敲除小鼠中观察到板层结构发育异常，其放射状迁移受到阻滞，并观察到 放射状胶质细胞的形态异常。以上研究结果提示内源性 LXRs 参与中枢神经系统的发 育，通过调节放射状胶质细胞的发育影响神经元的迁移及皮质的板层结构。已有研究 表明 LXRα和 LXRβ在小脑中都有表达，并在成年 LXRβ基因敲除小鼠中观察到旋 杆行为检测异常，提示内源性 LXRs 的活化可能参与小脑的发育与功能，但是其作用机制与途径目前仍不明确。在本课题中首先检测 LXRα和 LXRβ在小脑皮质发育过程中的表达模式，明确内 源性 LXRs 与小脑皮质发育的相关性。其次，LXRs 激动剂 T0901317 可同时激活 LXR α和 LXRβ，本课题中在小鼠生后早期腹腔注射 LXRs 激动剂 T0901317，并用 BrdU 标记新生的颗粒神经元来探讨激活内源性 LXRs 在小脑颗粒神经元迁移中的作用，并 探讨对贝克曼纤维发育的影响及机制。最后，通过观察 LXRs 激动剂 T0901317 处理后 对顺铂致小脑发育损伤后的作用，探讨 LXRs 对小脑皮质发育损伤的保护作用，进一 步阐明 LXRs 对小脑发育的影响与机制。本研究包括三部分：第一部分 分别从 mRNA 及蛋白水平检测 LXRs 在小脑发育中的时空表达模式采用矢状面相邻切片进行 Nissl 染色观察小鼠生后三周小脑各发育阶段的组织形 态。通过检测 LXRα和 LXRβ在小脑生后三周各发育阶段的表达模式，明确 LXRs 与小脑皮质发育的相关性。主要结果如下：1.Nissl 染色结果显示：生后三周为小脑发育的关键阶段其中包含了小脑皮质板层 形成的关键细胞学事件，如：颗粒神经元的迁移、小脑叶片的形成及皮质三层结构的 初步形成。2.运用 RT-PCR 检测 LXRs 的 mRNA 水平，结果发现：LXRα 和 LXRβ 在生后三 周均有表达，LXRα 在小脑的各发育阶段表达都很低，在生后 2 天时 LXRβ 呈高表达， 尤其在生后 5 天时，LXRβ表达至高峰，至生后 8 天、生后 14 天表达明显降低。提示 小脑为以 LXRβ 表达为主的脑区，其表达模式与小脑皮质发育密切相关。3. 运用免疫组化进行蛋白水平检测发现 LXRα 在小脑的各发育阶段表达都很低。 LXRβ 在外颗粒层低表达，但在浦肯野细胞层和内颗粒细胞层高表达。尤其在生后 5 天时，LXRβ表达至高峰，在内颗粒层表达最高。第二部分 激活内源性 LXRs 在小脑皮层发育中对颗粒神经元迁移的影响及作用机制LXRs 属于配体依赖的转录因子超家族,与相应的配体结合后才能被活化。氧化甾 醇是 LXRs 的天然配体，包括 22(R)、24(S)、27 一羟基胆固醇等，非氧化甾醇类配体 包括胆固醇生物合成的中间产物。化学合成的非甾醇类神经元激动剂有 T0901317 和GW3965 等,它们能够激活两种