药复方对嗅觉障碍实验动物嗅细胞凋亡机制影响的分析-analysis of the effect of compound prescription on the mechanism of olfactory cell apoptosis in olfactory dysfunction experimental animals.docx

中文摘要目的：1.探讨流感病毒致嗅觉障碍的发病机制是否为流感病毒感染后导致嗅 细胞通过死亡受体途径及线粒体途径发生细胞凋亡；2.探讨五龙颗粒起效途径为 通过调节细胞凋亡因子及其控制基因从而降低嗅细胞的凋亡进程，促进嗅感觉神经元的再生。方法：将无特异致病原的近交系雄性 C57 小鼠 72 只，饲养于成都中医药大 学附属医院药理学三级实验室。自由喂养 24 小时后，按随机化原则将小鼠随机 分为①正常组、②模型组、③中药低剂量组、④中药中剂量组、⑤中药高剂量组、⑥西药对照组。乙醚吸入麻醉，用可调微量移液器取 20μl 流感病毒鼠适应株 FM1 病毒液（滴度为 1:1280，稀释成 1/20 倍），滴于小鼠的前鼻孔，每侧 10μl，使 病毒液随呼吸气流缓慢进入鼻腔，待麻醉恢复后，将小鼠按组分笼隔离饲养。从 造模后第 1 天开始，观察小鼠的肛温、体重、行为、状态、体征、饮水量、摄食 情况、大小便性状；着重观察小鼠鼻部情况：鼻前庭有无分泌物及其质、量、色， 有无鼻塞，搔抓鼻部及对气味的敏感性等。造模后第 4 天开始灌胃，连续给药 7天后，处死。每组实验动物取 6 只，剥离上颌骨后取出鼻中隔，分离嗅区鼻顶部、 鼻中隔及鼻甲表面黏膜，观察光镜下嗅黏膜的病理形态变化；运用免疫组化方法 观察 C57 嗅黏膜 Fas、FasL 及 Caspase-3 等凋亡因子的表达。剩余 6 只小鼠在超净工作台上取嗅黏膜，提取 mRNA，并逆转录为 cDNA，用 RT-PCR 法测定Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、iNOS mRNA 及 OMP mRNA 的表达。结果：FM1 流感病毒可造成 C57 小鼠嗅黏膜中 Fas、FasL、Caspase-3 等凋 亡因子的表达增多，并且导致嗅黏膜 Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、iNOS mRNA 表达的上调及 OMP mRNA 表达的下调。用药后，各治疗组均能调节病毒感染造成的细胞凋亡因子及调控基因的表达，与 PVOD 模型组比较有统计学意义（P0.05）。结论：1.FM1 流感病毒感染后致嗅觉障碍的作用机制之一：通过影响实验小 鼠嗅黏膜 Fas、FasL、Caspase-3 的表达升高，从死亡受体角度促进嗅黏膜细胞 的凋亡；2.FM1 流感病毒感染后致嗅觉障碍的作用机制之二：通过影响实验小鼠嗅黏 膜 Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、iNOS mRNA 表达的上调，从线粒体途径促进嗅黏膜细胞的凋亡；3.通过上述两种细胞凋亡途径不仅嗅黏膜细胞凋亡增加，并且影响嗅黏膜 OMP mRNA 的表达，使其表达下调；4.五龙颗粒通过调节实验动物嗅黏膜 FAS、FASL、CASPASE-3 及 Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、iNOS mRNA 的表达起到治疗作用；进一步说明了五龙 颗粒的治疗作用是多角度、多层次、多靶点的。关键词：五龙颗粒；FM1 流感病毒鼠适应株；嗅觉障碍；细胞凋亡；信号 转导；免疫组化；RT-PCR。ABSTRACTOBJECTIVE：To study the pathogenic mechanism of post-virus olfactory dysfunction（PVOD） in apoptosis signal transduction and the mechanism of Wulong- pills in treating this disease from gene level.METHODS：We have performed series studies against apoptosis of olfactory sensory neurons （OSNs） and regeneration of basal cell in olfactory mucosa, and related genes which regulate cell apoptosis.Further more, we put forward thatvirus infection of upper respiratory tract disturd the balance between apopto- sis of ORNs and regeneration of basal cells,resulting in OSNs losing, might beone of etiopathogenesis of post-virus olfactory dysfunction （PVOD）.Establishing mus musculus’ PVOD modle with male C57 mus .Six groups are involved which are the Nor