金纳米粒子负载多标记物电化学发光dna检测方法的研讨.pdfVIP

金纳米粒子负载多标记物电化学发光DNA检测方法的研究 摘要 脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid，DNA)是生物遗传的主要物质基础。 生物机体的遗传信息以密码的形式编码在DNA分子上，表现为特定的核苷酸排列 顺序，并通过DNA的复制由亲代传给子代。碱基序列的变异与人类许多遗传疾病 有关。因此，对特定序列的DNA检测以及对DNA链中碱基突变的检测在疾病诊 断、药物研究、环境科学等方面具有深远的意义。传统的DNA检测方法是采用放 射性标记物质，这种检测方法虽然灵敏度高，但由于放射性物质对人体及环境有 危害。自20世纪80年代以来，各种非同位素标记的化学发光法、荧光分析法以 及电化学分析方法相继问世，这些方法虽然在一定程度上克服了同位素标记的缺 陷，但存在检测系统复杂、仪器价格昂贵、标记物不稳定等缺陷，还不能完全取 代传统的分析方法，特别是灵敏度不够高，达不到放射性标记检测方法的灵敏度。 因此，建立灵敏度高、准确性好的非放射性标记DNA。分析方法具有重要的意义。 术。该尺寸处在原子、分子为代表的微观世界和宏观物体交界的过渡区域，因此， 有着独特的化学性质和物理性质，呈现出常规材料不具备的优越性能。近年来纳 米技术在生物科学领域中的应用，引起了科学家的广泛关注。 电化学发光(Electrogenetated 的电压使电极反应产物之间或电极反应产物与溶液中某组分之间进行化学反应而 产生的一种光辐射。根据电化学发光的强度进行的分析方法称为电化学发光分析 法。该方法不仅具有化学发光分析的灵敏度高、线形范围宽和仪器简单等优点、 而且具有电化学分析的可控性强、选择性好等优点。本论文的研究工作旨在提高 电化学发光DNA传感器的灵敏度，以电化学发光物质钌联吡啶的衍生物标记 DNA，以金纳米粒子做探针载体和利用金纳米修饰电极，放大对目标DNA的检测 信号，提高检测方法的灵敏度。 本论文由绪论、研究报告两部分组成。第一部分为绪论，介绍了DNA传感器 原理、分类，总结了电化学发光分析体系和分析方法特点，纳米粒子的特性和制 各方法，评述了DNA检测方法的研究进展和应用，最后阐述了本论文的研究目的 和内容。 第二部分为研究报告，由两部分组成，第一部分为以金纳米为探针载体ECL 检测DNA的研究，提出金纳米粒子做探针载体，同时-(2，2-联吡啶)(2,2’．吡啶一4，4’- 后在含有三丙胺(TPA)的杂交缓冲溶液中施加电压，记录电化学发光信号，通过 电化学发光信号对目标DNA进行检测。试验发现，以金纳米为探针载体与传统的 DNA检测方法即在探针的一端只标记一个信号分子相比，可以极大的增强电化学 发光信号，这是因为在传统的检测方法中，在探针的一端只标记一个信号分子， 而以金纳米为探针载体，可以在金纳米上负载多个探针，每次杂交，有多个信号 分子，放大了目标DNA的检测信号，电化学发光检测信号与目标DNA的浓度在 1．0xlff9 mol／L浓度的靶DNA进行11次测定，相对标准偏差为4％。 研究报告的第二部分为基于金纳米修饰电极和探针载体DNA电化学发光分析 方法研究，建立了以金纳米修饰电极和以金纳米作探针载体的电化学发光检测 DNA新方法。以1,6一己二硫醇分子为连接剂，将金纳米自组装在金电极上形成金 纳米修饰电极，再将含巯基的目标单链DNA固定于金纳米修饰电极上，与以金纳 米粒子为载体的电化学发光DNA探针进行杂交反应，将杂交后的电极作为工作电 极，在含有TPA的溶液中进行电化学发光测量，根据电化学发光强度进行目标单 链DNA的定量检测。在选定实验条件下，检测囊肿纤维DNA片断(20base)的 明，金纳米具有较大的比表面积，可增强DNA在电极上的固定量，从而增强电化 学发光检测信号，提高方法的灵敏度。 关键词：电化学发光： 金纳米； 脱氧核糖核酸(DNA)； --(2，2-联吡啶)(2，2’一吡 啶-4，4’-二碳酸)琥珀酰胺钌； 11 for Acid ChemiluminescenceDetection Electrogenerated