喹乙醇人工抗原的合成与鉴定.pdfVIP

面 此 虐 }‘掌报 2O10，19(7)：1—6 ActaAgriculturaeBoreali—occidentalisSinica 喹乙醇人工抗原的合成与鉴定 宋春美 ，高爱中。，邓瑞广 ，职爱民 ，郅玉宝 ，侯玉泽 ，张改平 (1．河南省农业科学院，农业部动物免疫学重点开放实验室 ，河南省动物免疫学重点实验室 ，郑州 450002； 2．河南科技大学 食品与生物工程学院，河南洛 阳 471003；3．杭州 隆基生物技术有 限公司，杭州 310011) 摘 要 ：采用琥珀酸酐法合成喹乙醇半琥珀酸酯 (OLA-HS)，以质谱法对其进行鉴定；活化酯法合成全抗原 OLA～BSA、OIA—OVA，以紫外(UV)和凝胶电泳 (SDS)鉴定之 ；用 OLA-BSA免疫 BALB／c小 鼠，间接 ELISA测定多抗血清效价 ，阻断 ELISA 鉴定其敏感性 、特异性 。紫外扫描测得 0IA—BSA、OIAHOVA 中 OLA—HS和 BSA、OVA 的分子结合 比分别为 17．1：1和 12．4：1；3号小 鼠抗血清 的效价最高 ，对 OLA 的 ICso为 58．923ng／mL，与卡巴氧的交叉反应率为 1．841 ，与其他药物无交叉反应 。通过系列 EIISA鉴定， 获得高价、敏感、特异的多克隆抗体(pAb)，为 0IA残 留免疫学检测方法 的建立奠定基础。 关键词 ：喹乙醇 ；人工抗原 ；合成 ；鉴定 中图分类号 ：$859．84 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—1389(2010)07—0001—06 SynthesisandCharacterizationofArtificalAntigenofOlaquindox SONG Chunmei ，GAO Aizhong。，DENG Ruiguang ，ZHIAimin ， ZHIYubao ．HOU Yuze andZHANG Gaiping (1．KeyLaboratoryofAnimalImmunologyoftheMinistryofAgriculture．He’nanProvincialKeyLaboratoryfor AnimalImmunology，He’nanAcademyofAgriculturalSciences，Zhengzhou 450002，China；2．Foodand Bi0engineeringCollege，He’nanUniversityofScienceandTechnology，LuoyangHe’nan 471003，China： 3．HangzhouClongeneBiotechCo．，Itd，Hangzhou 310011，China) Abstract：The derivativeofolaquindox，calledasOLA—SH ，WaSsynthesized by succinicanhydride methodandidentifiedbymassspectrometry (M S)．Twocompleteantigensofolaquindox (OLA—BSA， OLA—OVA)werepreparedbyactiveestermethod (AE)．Thecharacterizationofhapten—proteincon— jugateswereexaminedbytwomethods，ultravioletspectrophotometry(UV)，andsodium dodecylsul— fatepolyacrylamidegelelectrophoresis(SDS—PAGE)，respectively．BAIB／C micewereimmunized withOLA—BSA ，thetitreofpolyclonalantibody(pAb)wasdetectedbyindirectELISA ．thesensitivity andspecificityofpAbwasidentifiedbyblockingELISA．AccordingtoUV scanning．theconjugation ratioofOLA—HSt