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  • 2018-06-06 发布于天津
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仪器检测文库质量片段尺寸是否符合要求.pdf

仪器检测文库质量片段尺寸是否符合要求

2100 仪器检测文库质量(片段尺寸是否符合要求) 表1:安捷伦高灵敏度DNA 试剂盒 安捷伦高灵敏度DNA 试剂盒(订货数量:5067-4626 ) DNA 芯片 安捷伦高灵敏度DNA 试剂(订货数量:5067-4627 ) 10 高灵敏度DNA 芯片 高灵敏度DNA Ladder (黄色盖子) 1 电极清洗器 高灵敏度DNA Markers (35/10380 bp )(4 管,绿色盖子) 注射器套件 高灵敏度DNA 染色溶液(1 管,蓝色盖子) 注射器 高灵敏度DNA 胶混合物(2 管,红色盖子) 涡旋混合器 表2 :物理和分析规格 类型 规格/安捷伦高灵敏度DNA 分析 分析运行总时间 45 分钟 可测定样品数量 每个芯片可测定11 个样品 样品用量 1µl 样品DNA 浓度范围 0.005ng/µl~0.5 ng/µl 试剂盒稳定性 4 个月 测定DNA 尺寸范围 50~7000bp 样品最大盐离子浓度 10mM Tris,1mMEDTA 1.芯片工作站 1) 用新的注射器替换旧的注射器; 2 )注射器紧密连接芯片工作站; 3 )连接完成后,注射器气密性检测; 4 )调整基部面板及注射器套件,准备上样检测文库质量。 2 .生物分析器 (调整芯片选择器) 1)打开仪器盖子,检查电极盒是否在仪器内; 2 )移除使用过的芯片,调整芯片选择器的位置。 3 .涡旋混合器 调整涡旋混合器的速度为2400rpm ,每个芯片使用时间为1min。 4 .启动2100 仪器软件 (双击桌面仪器控制软件图标) 5 .注意事项 1)试剂和样品避免灰尘及其它污染,试剂在4 ℃存放; 2) 试剂使用前,先在室温条件下平衡30 分钟; 3 )DNA 染色试剂(蓝色盖子)存放及使用时均应避光; 4) 加样时墙头尖端接触加样槽底端,避免接触加样槽边缘,加样时尽量避免 产生气泡; 5) 加样完毕,5 分钟内立即进行上机测试,避免放置较长的时间; 6 )仪器运行过程中,避免触摸仪器硬件,放置仪器的桌面保持静止状态,避 免震动; 7) 放置芯片、清洗电极及开关 2100 仪器盖子时动作要轻,避免出现较大的 碰撞或震动而导致损坏电极。 安捷伦高灵敏度DNA 分析流程: 一.制作胶、染色混合物(Preparing the Gel-Dye Mix ) 1.高灵敏度DNA 染色溶液(1 管,蓝色盖子)、高灵敏度DNA 胶混合物 (2 管 取1 管,红色盖子)室温热平衡30min ; 2 .低速涡旋高灵敏度DNA 染色溶液10 秒,确保DMSO 完全融化; 3 .取15µl 高灵敏度DNA 染色溶液(1 管,蓝色盖子)加到高灵敏度DNA 胶混 合物(1 管,红色盖子),剩余DNA 染色液放置到4 ℃避光保存; 4 .盖好管盖,涡旋10 秒,使胶混合物与染色液充分混匀; 5 .上述胶、染色液混合物全部转移至过滤管中,室温 2240g (6000rpm )离心 10min; 6 .弃过滤管,离心下来的胶、染色液混合物标记备用。 注意事项: (1) 制作一次胶、染色液混合物可供5 次DNA 测定用量,并且在6 周内使用 完毕; (2 ) 制作的胶、染色液混合物使用时避光,多余的胶、染色混合物放置在4 ℃、 避光保存。 二、装载胶、染色混合物 1.胶、染色混合物使用前室温热平衡30min,同时进行避光处理; 2 .取新的高灵敏度DNA

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