gabab受体在神经干细胞c17.2中的分子机制及功能研究-molecular mechanism and function of gabab receptor in neural stem cell c 17.2.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□ ，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日1 绪论GABAB受体是G蛋白偶联受体，其配体GABA(γ-氨基丁酸)是脑部主要的抑制性神经递质。早期，由于GABAB受体包含几种不同的药理学特性，所以认为受体包含几种不同的受体亚型，随着对GABAB受体不断深入的研究发现受体只存在两种亚型，使研究者更加迷惑为什么会呈现众多的药理学特性和功能。GABAB受体是GPCR家族中最为特殊的，研究表明GABAB受体主要是异源性受体，其由GABAB1和GABAB2两个亚基构成[1]。已知的GABAB1主要有两个亚型—GABAB1a和GABAB1b。在小鼠中GABAB1 的两种亚型在大多数的神经元中共表达，另外两个亚型都是来源于同一个基因，只是有不同的启动子起始翻译[2]。对GABAB受体的研究表明GABAB受体主要是控制一些突触递质的释放，GABAB受体通过Gβγ调控突触前与突触后的K2+与Ca2+通道[3]。由于GABAB受体涉及很多的生理活动，对其研究也较为透彻，所以历来被人们认为是很有希望的药物靶点。临床的数据说明GABAB受体激动剂baclofen具有很好的效果，但是由于人自身的药物耐受性以及负效应，baclofen的使用受很大地限制。期望新的复合物可以克服GABAB受体激动剂的缺点。基于此，研究GABAB受体系统是否涉及其它功能性蛋白或本身的药理学多样性是至关重要的。GABAB受体概述GABAB受体的结构GABAB受体具经典的七次跨膜结构。GABAB受体的cDNA在1997年被分离出来，同时被发现的GABAB受体是GPCR家族C成员的第一个异源二聚体。受体的两个亚基通过分子C端形成螺旋-螺旋结构相互作用。GABAB受体的特殊之处在于其需要两个亚基组成异源二聚体才会具有完整的生理功能，这种现象还没有在其他G蛋白偶联受体中发现过。GABAB受体的N端为胞外区域，具有一个捕捉配体的捕蝇夹结构（VenusflytrapdomainVFT）和负责异源G蛋白识别与激活的HD区域（Heptahelicaldomain），HD区为中间七次跨膜区，以螺旋结构形式存在[4、5]。图示1GABAB1与GABAB2的结构示意图Fig1 Schematic structureof GABAB1 and GABAB2.(Cryan,J.F.andK.Kaupmann.TrendsPharmacolSci,2005.)GABAB1与GABAB2受体亚基分子多样性GABAB受体的两个亚基的结构相似度高达35%，只是两个亚基如果独立存在的时候都不起功能作用，只有两者相互形成异源二聚体才具有功能[6]。最近有学者不同意这样的观点，他们的研究表明单独滞留在内质网的GABAB1具有生理功能。他们认为两个亚基可以独自形成同源二聚体[63]。GABAB受体的两个亚基GABAB1和GABAB2都是七次跨膜，都具有捕蝇夹结构VFT结构。GABAB1的VFT区可以与配体或激动剂结合从而激活受体，但是GABAB2亚基虽具有VFT区，却不能与配体或激动剂激活。GABAB2亚基与G蛋白结合，激活下游途径。另有报道认为GABAB1也可以与G蛋白结合，从而激活下游信号[7]。GABAB1的两个亚型属于同一基因的不同剪接体，它们的cDNA比较长，类似于同一家族的mGluR。在人类细胞中，GABAB1a基因具有22个外显子；而在小鼠中只具有20个外显子。另外GABAB1a的N端区域含有两个约有六十多个氨基酸组成的疏水区域，推测疏水区域可能介导受体与其它相关蛋白相互作用或者帮助GABAB1a在胞外区域的具体定位。而GABAB1b基因对比GABAB1a基因缺少N端的四个外显子。另外现在很确定GABAB1的C末端存在精氨酸残基的滞留序列RSRR，其滞留ER中未聚集的GABAB1 亚基以及限制异源受体在膜表面正确组装的表达。推测GABAB1的RSRR序列被GABAB1和GABAB2相互作用所掩蔽，其引发转运的趋势[