阈下电刺激对大鼠缺血心肌细胞凋亡及bcl-2 bax表达的影响-effects of subthreshold electrical stimulation on apoptosis and bcl - 2 bax expression in ischemic myocardial cells of rats.docxVIP

阈下电刺激对大鼠缺血心肌细胞凋亡及 bcl-2、bax 表达的影响专业：内科学（心血管病）研究生：杨峰导师：刘兴德 教授【摘要】 目的：探讨阈下电刺激对大鼠缺血心肌细胞凋亡及bcl-2和bax基因表 达的影响。方法：采用大鼠左冠状动脉前降支结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型。 wistar大鼠24只，随机分为四组，A组（假手术组）：左冠状动脉前降支起始下2mm 处穿线而不结扎，并置入电极但不予电刺激。B组（急性心肌梗死组）：左冠状 动脉前降支起始下2mm处穿线结扎建立心肌梗死模型，植入电极但不予电刺激。C 组（电刺激缺血区组）: 建立心肌梗死模型，于缺血区植入电极，给予25 Hz、 0.3V阈下电刺激。D组（电刺激非缺血区组）: 建立心肌梗死模型，于非缺血区 植入电极，给予25 Hz、0.3V阈下电刺激。运用TUNEL法检测心肌细胞凋亡；运用 免疫组化和RT-PCR的方法检测心肌bcl-2及bax的表达。结果：(1)与A组比较，B组、C组、D组心肌细胞凋亡指数显著升高(P O.05)； 与B组比较, C组、D组心肌细胞凋亡指数降低(P O.05)； C、D两组间无显著性 差异。(2)与A组比较，B组、C组、D组心肌细胞bcl-2和bax基因表达显著升高(P O.05)；与B组比较, C组、D组心肌细胞bcl-2基因表达显著升高，而bax基因表达 显著降低(PO.05)；C、D两组间bcl-2、bax基因表达无显著性差异。结论：阈下电刺激能显著减少大鼠心肌梗死后缺血心肌细胞凋亡，其机制可 能与上调bcl-2表达和下调bax表达有关；阈下电刺激刺激缺血区和非缺血区均可 减少大鼠心肌梗死后缺血心肌细胞凋亡。关键词：电刺激，急性心肌梗死，细胞凋亡，bcl-2，bax前言冠心病是人类常见病、多发病。在欧美国家占人口总数的1/3，占心脏病死 亡数的50一75%[1]。我国冠心病发病虽然低于西方工业化国家，但随着我国经济 发展和人民生活方式的改变，本病亦有日益增多的趋势[2] ，顾越来越引起广泛 的关注 。 近 20 年来对 冠心病 的治疗取得了长足进 步 ，冠状动脉介入治疗 （percutaneous coronary artery intervention ,PCI），冠状动脉旁路移植术（coronary artery bypass graftin ,CABG）的应用对挽救濒死心肌、缩小梗死 面积、改善预后、降低死亡率及并发症起到了积极的作用，但临床上尚有部分病 例如：多支血管重度病变或弥漫性病变、冠脉远端血管细小、已多次行冠脉手术 的患者，此时上述治疗手段疗效受限或难以进行，因此积极寻找新的治疗方法成 为医学界研究的重点和热点。心肌缺血可引起缺血区心肌细胞死亡，最终可导致心衰发生。近年的研究显 示，细胞凋亡参与急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）心肌细 胞的死亡，并在心室重构、心功能改变过程中起关键作用。因此如何有效降低缺 血心肌细胞凋亡日益成为减少心肌缺血损伤的研究热点。早在100多年前，生物电学的奠基人Du Bios-Rey—mond就首次提出内源性电 场具有促使损伤愈合等生物学效应。电刺激在骨科的康复理疗方面的作用已经逐 步得到认可，神经内科的脑循环系统治疗仪也用于临床，但电刺激应用于心血管 相关疾病治疗研究的报道不多，有学者研究发现阈下电刺激能显著上调大鼠缺血 心肌中VEGF的表达从而促进血管新生[3],推测其可能对缺血心肌产生保护作用。 但是阈下电刺激能否对大鼠急性心肌梗死后缺血心肌细胞凋亡及bcl-2、bax表达 产生影响的研究尚未见相关报道。本研究通过建立大鼠AMI模型，观察阈下电刺激对大鼠AMI后缺血心肌细胞凋 亡的影响并探讨其基因机制，为临床治疗缺血性心肌病提供基础研究资料。1材料1.1 实验动物材料与方法Wistar 大鼠 24 只，雌雄不拘，170-250g（贵阳医学院实验动物中心提供）1.2 主要试剂TUNEL细胞凋亡试剂盒（武汉博士德） 浓缩型免疫组化试剂盒（武汉博士德）组成：A：正常山羊血清封闭液 B：生物素标记的第二抗体 C：SABCbax 一抗（兔抗IgG，武汉博士德） bcl-2 一抗（兔抗IgG，武汉博士德） DAB （武汉博士德）DEPC （大连宝生物）RNA prep pure Tissue Kit(天根生化) TIANScript RT Kit(天根生化)Marker (天根生化)2×Tap Plus PCR MasterMix(天根生化) 琼脂糖（西班牙） 其他试剂均为国产试剂1.3主要仪器心电图机DH-150 型小动物呼吸机( 浙江大学仪器厂)PES-4 型 电生理诊疗仪（中国 太平电信设备厂 苏州） AB104－N 电子天平5745 台式冷冻离心机