HPLC测定杭白菊茎叶蒙花苷含量.docVIP

HPLC测定杭白菊茎叶蒙花苷含量 　　【摘要】目的：测定杭白菊茎叶中蒙花苷的含量。方法：以甲醇-乙腈（15:85）为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱；色谱柱为Welch Materials AQ-C18 (5μm, 4.6mm×250mm)；检测波长：334nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。结果：蒙花苷在0.401~2.05micro;g线性关系良好，平均回收率为98.67%，RSD小于1.68%。13批杭白菊茎叶中蒙花苷的含量为（0.258±0.089）%。结论：本方法重现性好，专属性强，为杭白菊茎叶的质量控制和开发利用提供科学依据。 　　【关键词】 杭白菊茎叶；蒙花苷；含量测定 　　 　　杭白菊是菊科植物菊Chrysanthemum morifolium (Ramat.)的干燥头状花序，具有“散风清热，平肝明目”等功效[1]，临床上主要用于治疗风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛等疾病。国内外对杭白菊（花序）的化学成分、药理作用、测定方法等方面已有大量研究[2-6]]，目前关于杭白菊茎叶的研究也有少量报道[7-9]]。具报道杭白菊茎叶也具有“清肝明目、解毒消肿”等功效[10]，药理研究表明其具有有抗氧化、抗菌等作用[11]。为了进一步研究杭白菊茎叶的药用价值，本试验对4个不同种植产地的杭白菊茎叶中的蒙花苷进行了含量测定，本研究为杭白菊茎叶的综合开发利用提供依据。 　　1仪器与材料 　　仪器：Waters 2695 高效液相色谱仪：(四元泵、2998光(电)二极管矩阵检测器、Empower色谱工作站)；十万分之一天平（Sartorius 公司）。 　　试剂：甲醇、乙腈为色谱纯；水为去离子水；磷酸、乙醇为分析纯。生药样品：杭白菊茎叶采摘于浙江省桐乡市各杭白菊种植产地，由中山市医药公司提供。所采摘样品室温阴干，分装密封后贮存。蒙花苷对照品（1528-200910）由中国药品生物制品检定所提供。 　　2 色谱条件 　　色谱柱：Welch Materials AQ-C18 (5μm,4.6mm×250mm)；流动相：甲醇-乙腈（15:85）为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱；检测波长：334nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：20 μl。含量测定和指纹图谱的梯度洗脱时间程序分别见表1,色谱图见图1。 　　3试验溶液制备 　　3.1对照品溶液的制备取蒙花苷对照品约10mg，精密称定，置于50 ml量瓶中，加70%乙醇溶液至刻度，摇匀，即得。（???1ml含蒙花苷205μg） 　　3.2供试品溶液的制备取杭白菊茎叶细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，冷却至室温，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。 　　4方法学考察 　　4.1线性关系 　　分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml蒙花苷对照品溶液置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件进样测定，以峰面积对进样量进行线性回归，得线性方程为：A=2.000×109C＋1.597×104 ，r=0.999 8。结果表明：蒙花苷在0.41~2.05micro;g范围内线性关系良好。 　　4.2精密度试验取同一对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测得蒙花苷峰面积的RSD为0.96%、。 　　4.3重复性试验取同一批供试品6份，按“3.2”项制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果蒙花苷为0.312%；RSD为1.25%。 　　4.4稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、2、4、8、12、24h进样测定含量，蒙花苷含量的RSD为1.02%。 　　4.5加样回收率试验取已知含量的样品0.5g，精密称定，精密加入蒙花苷对照品1.658mg，照“3.2”项下操作，测定含量，结果蒙花苷的平均回收率分别为98.67%，RSD为1.68%（n=6）。 　　5样品测定 　　取杭白菊茎叶样品，照“3.2”项下制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算蒙花苷的含量，结果见表2。 　　6讨论与结论 　　6.1方法学验证表明，在实验条件下，用RP- HPLC法测定杭白菊茎叶中蒙花苷的含量，其色谱系统能够适应测定需要，分离度、重复性试验能够满足药典要求。样品重复性实验、样品溶液稳定性、加样回收率、耐用性实验结果均很满意。 　　6.2耐用性实验 　　6.2.1色谱柱的选择 分别比较了Agilent TC-C18（5μm,4.6mm×250mm）、Grace Smart RP18(5μm,4.6mm×250mm )和Welch Materials AQ-C18（5μm,4.6mm×