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miRNAs及其功能研究进展 　　[中图分类号]Q75 　　[文献标识码]B 　　[文章编号]1005-0019(2009)7-0022-03 　　[摘要]miRNAs是一类在细胞内合成后通过抑制mRNA的稳定性或降解靶mRNA来调节基因表达的单链小RNA分子。无论是在动物中还是在植物中都可以与靶mRNA特异的结合影响mRNA的转录,从而对机体基因的多样性、复杂性进行调节,影响细胞、组织的生长和分化甚至与人类的一些疾病有着密切的关系。 　　[关键词]miRNAs;mRNA;结合;基因;癌;肿瘤 　　 　　miRNAs(微小RNA,microRNAs)是类长度为21～30nt,具有显著生物学意义的非编码蛋白质的单链小RNA分子[1]。miRNAs通过基因切割和翻译抑制的方式调节-些信号分子,并对至少1/3的人类基因发挥非常重要的表达调节作用[2]。miRNAs的丰富程度和重要作用随着研究的深入逐渐被人们所认知,同时对miRNAs的研究也成为新的热点。本文着重就miRNAs的发现、合成、作用机制及其在生物体内的功能研究等方面作-综述。 　　 　　1miRNAs的发现 　　 　　1993年Lee等[3]在秀丽新小杆线虫中发现了第-个可阶段性调控胚胎后期发育的miRNA,命名为lin-4。之后,Reinhart等[4]同样又在线虫C.elegan中发现了第二个对其时序性发育进行调控的miRNA基因let-7。它们的长度很短且作用时间很短暂,所以最初被称为小时序RNA。随后,又在其它生物中发现了大量类似的RNA,2001年起便将其统-命名为miRNAs。经研究发现在人类基因组可能含有1000种左右的miRNAs,其中-小部分不是人类所特有的,但是对人类保持其特异性发挥了很大作用[5]。miRNAs在人体内参与了许多生命活动的调节,并且还可能与许多疾病的发生、发展有着密切的关系,因此受到人们的广泛关注。 　　 　　2miRNAs的生物合成 　　 　　miRNAs并不是由其相应基因序列直接转录形成的。它的形成和成熟需要经过两个主要的加工过程,分别由RNAse-III酶Drosha和Dicer剪切完成[6]。在细胞核内编码miRNAs的基因通过RNA聚合酶II的作用转录产生pri-miRNAs。Pri-miRNAs的大小通常只有几个kb,它与编码蛋白质的mRNAs的结构相似,具有3’端多聚腺苷酸化和5’端帽[7]。Drosha与Drosha相关结合蛋白Pasha(也被称为DGCR8)组成的复合物可以剪切pri-miRNAs,使之形成具有茎环结构长度约70个核苷酸的miRNA前体(pre-miRNAs)[8]。pre-miRNAs在Ran-GTP依赖的核质/细胞质转运蛋白Exportin5的作用下,从核内运输到胞质中。在Dicer酶[9]的作用下,miRNA前体被剪切成21～25个核苷酸长度的双链miRNA。miRNA两条链的3’端均有2个游离核苷酸[10]。最初,成熟的miRNA与其互补序列互相结合形成miRNA:miRNA双螺旋结构。随后,双螺旋结构解旋,其中一条成熟的单链以不对称的方式结合到RNA诱导的基因沉默复合物(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC)[11]上。该复合物会与有互补序列的mRNAs结合,通过调整mRNA的稳定性或靶mRNAs的翻译,影响蛋白质的合成从而调节基因的表达。 　　 　　3miRNAs沉默基因的作用机制 　　 　　目前认为miRNAs通过抑制mRNA翻译或是降解mRNA来调节基因表达。在植物中,miRNAs沉默基因的主要机制是含有Slicer的具有切割功能的RISC降解mRNA[12]。当miRNAs和靶mRNA完全配对结合或几乎完全配对结合后,与siRNA作用机制相似,miRNAs直接介导RNA干涉特异性复合物RISC切割靶mRNA[13];同时可能引发Slicer在mRNA5’端第10个和第11个核苷酸之间切割[14]。 　　而在动物中,大多数miRNAs通过不具备切割功能的RISC抑制翻译而发挥作用[15],当miRNA和靶mRNA不完全配对结合时,miRNA主要影响mRNA的翻译过程而对mRNA的稳定性并无任何影响。大多数miRNAs和靶mRNA3’端的非编码区(uTRs)结合,也有些miRNAs可以和开放阅读框(ORF)或5’端的编码区(UTR)结合[16],抑制的程度跟miRNAs与mRNA结合位点的数目有关。哺乳动物中只有少数miRNAs是通过类似于RNA干涉的方式直接切割靶mRNA发挥作用的。 　　 　　4miRNAs的生物学功能 　　 　　4.1miRNAs调节靶基因的多样性和复杂性:诸多研究表明miRNAs参与的基