MMP -9及TIM P-1在口腔白斑及白斑癌变组织中表达及意义.docVIP

MMP -9及TIM P-1在口腔白斑及白斑癌变组织中表达及意义 　　【摘要】目的：探讨MMP-9、TIMP-1在口腔癌变发病机制中的作用和意义。方法:采用免疫组化染色SP法对人口腔粘膜白斑50例、白斑癌变患者18例及正常口腔粘膜18例的粘膜鳞状上皮细胞MMP-9及TIMP-1表达进行半定量性分析。结果: 粘膜白斑．白斑癌变MMP-9 、 TIMP-l的表达均高于正常口腔黏膜组织( P 　　【关键词】白斑；基质金属蛋白酶-9；基质金属蛋白酶抑制剂-1；免疫组织化学；白斑癌变 　　MMP -9 and TIM P-1 in oral leukoplakia and leukoplakia tissues and its significance 　　【Abstract】 Objective MMP -9 and TIM P-1 in oral leukoplakia and leukoplakia tissues and its significance. Methods: Immunohistochemistry SP method were 50 cases of oral leukoplakia, 18 patients with leukoplakia and normal oral mucosa of 18 cases of mucosal squamous cell MMP-9 and TIMP-1 expression was semi-quantitative analysis. Results: leukoplakia. Leukoplakia MMP-9, TIMP-l expression were higher than normal oral mucosa (P [1]。口腔粘膜白斑中MMP-9及TIMP-1的表达如何，罕见报道。本研究采用MMP-9及TIMP-1单克隆抗体检测白斑组织 50例。白斑癌变组织18例。研究MMP-9及TIMP-1与白斑癌变过程之间的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料:2001年3月~2009年3月经本院病理确诊的口腔粘膜白斑患者 50例，其中男性32例，女性l 8 例 ，年龄最大68岁， 最小37岁。在口腔粘膜白斑的基础上长期追踪后发现鳞癌的患者 1 7例，其中男性1l例，女性6例，年龄最大 6 8岁，最小49岁。人正常口腔粘膜组织 1 8例为对照组。取病变组织及正常口腔粘膜组织由病理科制成蜡块备用。 　　1.2 方法 采用免疫组化SP方法对18例正常口腔粘膜标本，50例口腔粘膜白斑标本，18例口腔白斑癌变标本进行检测试剂MMP-9，TIMP-1鼠单克隆抗体为一抗，工作浓度分别为1：80，1：100；SP试剂盒(包括生物素标记的第二抗体、第二抗体非免疫性山羊正常封闭血清、SP溶液、复合消化液等)、胰酶、DAB显色剂（二氨基联苯胺）购自Zymed公司，双氧水、中性甲醛均购自北京鼎国生物公司。用磷酸盐缓冲液代替一抗作为空白对照，SP法染色MMP -9，TIMP-1。具体操作按说明书进行，6μm石蜡切片常规脱蜡水化,由胰酶消化15min修复抗原,加50μL 过氧化物酶阻断液室温15min,加50μL非免疫性山羊血清室温10min,分别加一抗（MMP-9，TIMP-1鼠单克隆抗体）室温2h,加二抗室温10min,加链霉亲和素-过氧化物酶室温10min后二氨基联苯胺显色,苏木素轻染,脱水,透明,封片。同时用PBS分别代替抗体作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。置于400倍物镜下，每张切片随机选6个视野，用Olympus Micro Image 4．0图像处理系统自动计数免疫阳性细胞数。采用两人双盲法观察切片，以细胞浆内出现棕色、棕黄色颗粒为阳性细胞，以Bresalier[2]半定量公式判断染色结果。综合染色强度和阳性细胞数量分级,按着色强度将无、弱、中、强分别记为0~3分:按阳性细胞比例数将＜20%为0 分,20%~50%为1 分,50%~75%为2分,＞75%以上为3分。两者相加后分3级:0~2分为(-), 3~4 分(+),≥ 5分(++)。VEGF表达的判定以染色强度和阳性纽胞百分率的得分之和进行评估。a．染色强度：阴性为0，弱阳性为1，阳性为2，强阳性为3；b．阳性细胞百分率：无阳性细胞为0，≤25 为1，26 ~5O 为2，5O 为3；a+b之和最高为6，0~2视为阴性，3~6视为阳性。根据公式计算每张切片的平均染色强度：I?s＝0×F?0＋1×F?1＋2×F?2＋3×F?3。记I?s＝0为阴性，0＜I?s≤1为弱阳性，1＜I?s≤2为中度阳性，2＜I?s≤3为强阳性。 　　1.3 统计方法 各组间上皮MMP-9，TIMP-1表达阳性率采用X?