P22phox与PPAR-γ基因多态性与冠心病关系.docVIP

P22phox与PPAR-γ基因多态性与冠心病关系 　　摘要 ： ［目的］ 探讨细胞色素b245（P22phox）C242T和过氧化体增殖物激活型受体-γ（PPAR-γ）C161T基因多态位点的基因型分布与冠心病危险性的关系。 ［方法］ 采用病例-对照研究，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法分别检测P22phox和PPAR-γ基因型。 ［结果］ 总的研究人群中P22phox基因的C和T两种等位基因分布频率为92.72%和7.28%；携带CT+TT基因型的研究对象患冠心病的危险性降低（OR=0.45，95%CI：0.23～0.87）；在PPAR-γ基因中TT基因型者在冠心病组和对照组的分布分别为15.23% 和24.01%，两组比较差异有显著性（PphoxCC基因型个体相比，具有PPAR-γ CT基因型且P22phoxCT+TT基因型的个体患冠心病的危险性降低（校正OR=0.24，95%CI：0.07～0.85，PphoxCT+TT基因型和PPAR-γ CT基因型的个体，患冠心病的危险性降低。 　　关键词:冠状动脉疾病；P22phox；PPAR-γ；多态性 　　文章编号:1006-3617(2007)01-0001-04中图分类号:Q786 文献标识码:A 　　冠心病的发生是多因素、多基因、多步骤相互作用的结果。在冠心病的发生过程中，不同基因型的个体可能对环境危险因素的易感性不同，从而导致患冠心病危险性不同［1］。烟酰胺脱氢酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADH，NADPH）氧化酶是血管系统超氧化物的主要来源，在冠心病发生发展中起着重要作用。细胞色素b245（P22phox）作为NADH和NADPH氧化酶的一个亚单位，在传递电子及产生超氧阴离子方面起着重要作用，P22phoxC242T基因多态性可能与冠心病发生有关［2］，但目前有关其与冠心病关系的研究出现了截然相反的结论［3～6］。过氧化体增殖物激活型受体-γ（PPAR-γ）属配体活化型的转录因子，其基因定位于3p25-24，编码3种mRNA分子：PPAR-γ1，PPAR-γ2，PPAR-γ3，属于核受体超家族［7］，它在转录水平上调节脂质代谢和细胞因子的产生，并在糖代谢过程、胰岛素敏感性及肥胖、糖尿病的发生过程中起着重要的作用［8］，在冠心病的发生发展过程中既有促进作用又有抑制作用，但最终作用并不明确，目前PPAR-γ的基因多态性正成为研究的对象。为了探讨上述两种基因的多态性与冠心病的关系，本研究采用病例-对照设计探讨PPAR-γ与P22phox基因多态性在冠心病中的单独及相互作用。 　　 　　1 资料和方法 　　1.1 研究对象 　　病例来源于2002年7月至2003年3月在武汉城区3大医院心内科住院确诊的或经冠状动脉造影检查并符合WHO冠心病诊断标准的冠心病患者，共151例为病例组。对照来源于武汉城区经病史询问、体检及心电图等检查未提示有冠心病和严重的肝、肾疾病的非冠心病人群，共245例为对照组。采用Inter-heart调查表收集研究对象的一般情况、家族史、职业史、既往史、生活环境、营养情况、生活史等并取得研究对象的知情同意书。有周围血管疾病或周围血管栓塞疾病者均未入选。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 基因组DNA抽提 抽取肘静脉血6 ml，注入肝素抗凝离心管，摇匀。取300 μl全血按PUREGENE DNA提取试剂盒说明书进行DNA抽提。 　　1.2.2P22phoxC242T与PPAR-γC161T基因型测定扩增P22phox：上游引物：5′-TGCTTGTGGGTAAACCAAGGCCGGTG-3′；下游引物： 5′-AACACTGAGGTAAGTGGGGGTGGCTCCTGT-3′；扩增PPAR-γ：上游引物：5′-CAAGACAACCTGCTACAAGC-3′；下游引物：5′-TCCTTGTAGATCTCCTGCAG-3′。PCR产物分别用限制性内切酶Rsa I 和EcoR I酶切，酶切产物分别用2％琼脂糖凝胶与8％聚丙烯酰胺凝胶电泳。用溴化乙锭（EB）显色后用法国VL公司全自动凝胶成像系统照相后保存，结果见图1和图2。 　　M：25 bp DNA ladder marker；1、5：PCR产物；2、3：CT；4：TT；6、7、8：CC 　　图1 经RasⅠ消化后PCR-RFLP方法检测P22phox基因C242T多态性电泳图 　　Figure 1 Electrophoresis results of P22phox digested by Rsa I 　　M：25 bp DNA ladder marker；1：TT；2：CT；3、4、5：CC 　　图2 经EcoR Ⅰ消化后PCR-RFL