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异位康合剂质控方法探讨 　　 　　 　　265500山东烟台市福山区人民医院 　　 药剂科 　　doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2011.06.013 　　异位康合剂是由莪术、水蛭、桃仁、川芎、蒲黄、黄芪等九味中药煎煮而成，为棕黄至棕褐色液体，气微香，味微苦。具有活血化瘀，止痛的作用。适用于子宫内膜异位症，中医辨证属寒凝、气滞血瘀症者。黄芪为其主要成分之一。 　　黄芪甲苷（Ⅳ）是黄芪的主要指标成分及活性成分之一，目前黄芪药材及复方中药制剂大多以黄芪甲苷为质量评价标准。黄芪甲苷由41个碳原子组成，属于三萜环阿屯烷型，其苷元为环黄芪醇，与二糖链相连形成三萜皂苷。黄芪甲苷能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。 　　药理实验表明，黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力，对抗体形成细胞数具有双向调节作用，可以调节机体状态，加强其适应能力，可以改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌，还能抑制自由基的产生和清除体内过剩的自由基，保护细胞免受自由基产生的过度氧化作用的影响，进而延长细胞寿命。 　　近年来，对黄芪甲苷的提取及含量测定方法的研究很多。提取方法除醇提法与水提法外，超声提取法、回流法、索氏提取法、高速离心法、超滤法、水提醇沉法等也有应用，既提高了收率，又降低了成本；其测定方法主要有高效液相色谱法、薄层扫描法、比色法等。2000年《中国药典》及《中国兽药典》采用薄层扫描法进行含量测定【sup】［1，2］【/sup】。该方法存在许多不足，像前处理步骤较多、排除干扰较困难、数据准确度较差等。本实验不予采用。而高效液相色谱法对样品的分离不受挥发度、热稳定性及分子量的影响，分离效能高，速度快，方法简单，数据的获得较容易。笔者参照《中国药典》2005年版高效液相色谱法及其他相关文献特探讨用高效液相色谱（HPLC）法对该制剂中黄芪甲苷的含量进行测定。目的是建立一种对异位康合剂进行质控的准确度高，灵敏度好的方法。 　　资料与方法 　　仪器：Waters高效液相色谱仪，510型泵，490E型紫外检测器，745型数据处理仪。对照品：黄芪甲苷购自中国药品生物制品检定所。样品：异位康合剂。试剂：乙腈为色谱纯，甲醇、正丁醇、乙醚均为分析纯，水为超纯水。 　　色谱条件：十八烷基键合硅胶柱（3.9mm×250mm），流动相乙腈-水（1:2.3），流速1.0ml/分，检测波长203nm，柱温为室温，灵敏度0.08AUFS。理论板数＞4000。 　　对照品溶液的制备：取黄芪甲苷标准品4.60mg（精密称取），加甲醇定溶于10ml的容量瓶中，超声震荡使充分溶解，作为对照品溶液。 　　标准曲线的绘制：精密吸取黄芪甲苷标准液200μl，分别以2.5，5，15，20，40μ进样l，按上述色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积为纵坐标，样品含量为横坐标，绘制工作曲线，得回归方程为Y208856X-33764，r0.9998；线性范围为1.15～18.4μg。 　　结 果 　　系统适用性实验：提取溶剂的预试取同批试样，精密量取20ml，分别置3支索氏提取器中，分别加甲醇、无水乙醇、95%乙醇60ml，加热回流提取至提取液无色，提取液浓缩至干，残渣加水20ml，微热使其溶解，先用乙醚振摇提取2次，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，合并正丁醇提取液后，用氨试液提取2次，20ml/次，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液【sup】［4］【/sup】。取供试品溶液10μl进样，测定峰面积，计算黄芪甲苷的含量。结果表明，以甲醇为溶剂，含量测定结果最高。见表1。 　　提取方法试验：取同批试样，精密量取3份，每份20ml，样1置于索氏提取器中，加甲醇60ml，加热回流提取2小时；样2加甲醇60ml，超声处理2小时；样3加甲醇60ml，于80℃温浸提取2小时。其余按提取溶剂预试方法制备。分别取3种供试品溶液10μl进样，测定峰面积，计算黄芪甲苷的含量，结果表明，用索氏提取器回流提取测得的黄芪甲苷含量最高。见表2。 　　提取时间的试验：取同批试样，分别精密量取6份，每份20ml，置索氏提取器中，分别加甲醇60ml，分别加热回流提取1小时、2小时、2.5小时、3小时、3.5小时、4小时其余按提取溶剂方法制备。6种供试品溶液，分别取10μl进样，测定峰面积，计算黄芪甲苷的含量，结果表明，加热回流提取3小时测定的黄芪甲苷含量最高。 　　供试品溶液的制备：精密量取20ml供试品溶液，超声震荡14分钟，置索氏提取器中，加甲醇60ml，加热回流提取3小时，提取液浓缩至干后，残渣加水20ml，微热使其溶解，先用乙醚振摇提取2次，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，20ml/次，合并正丁醇提取液后