基于杂交链式反映与氧化石墨高灵敏度检测microrna的荧光传感器分析-fluorescence sensor analysis based on hybrid chain reaction and graphite oxide high sensitivity detection of microrna.docxVIP

保护知识产权声明f放刷版硝:1t，共享挤酥揪本人为申请河北大半位所提交的题目为宇生据 1r4tm酬的最挑挑俐的学位论文，是我个人在导师 .卫平)指导并与导师合作下取得的研究成果，研究工作及取得 的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成的。本人完全 了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定的各项法律、行政法规以及河北 大学的相关规定。本人声明如下:本论文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大学的书 面同意和授权，本人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反 本声明， ‘本人愿意承担相应法律责任。声明人:扬在1 习日期:旦年_j Ji/0日作者签名: 导师签名:她倒日期:卫平年_6_Ji--IOL:: 日在 v左日期:丛丛年兰一月二L日摘要摘要MicroRNAs（miRNAs）是一系列内源的非编码小分子 RNA（19-24 碱基）。MiRNA 对体内基因的表达起着关键性的作用，并且许多癌症和多种疾病的发生与特定 miRNA 的异常表达有着密切的联系。因此，特定 miRNA 的高灵敏度检测在未来的临床诊断中 有着非常重要的作用。由于许多重要 miRNA 在生物样品中的浓度非常低，往往需要高 灵敏度的核酸扩增技术以达到 miRNA 的检测标准。但是这些核酸扩增手段往往需要有 酶的参与，在每一种放大反应中都需要一种或多种酶的参与，否则放大反应不能进行。 酶的活性受环境的影响很大，因此这些基于酶的放大反应都需要很洁净的样品环境检测 miRNA。这就极大地限制了这些放大反应在复杂的生物样品中的应用。针对 miRNA 检测我们提出了一种新的无酶信号放大策略，应用了杂交链式反应（HCR）信号放大和氧化石墨烯（GO）表面固定的检测手段。在该体系中，两种稳定 的茎环结构的 DNA 探针在没有靶标 miRNA 的溶液中能够稳定的共存，但是当加入靶 标 miRNA 作为引发剂之后，靶标 miRNA 即会引发一连串的杂交反应，产物是带有缺 口的长链双螺旋 DNA 结构。HCR 完成后，两种茎环结构的荧光探针和累积了荧光染料 的 HCR 的产物共同存在于同一均相溶液中，这样我们就需要应用一种方法将 HCR 的反 应物和产物区分开来，从而达到对 miRNA 检测的目的。研究发现 GO 可以通过 π-π 堆积作用强烈的吸附核酸探针分子。荧光标记的茎环结 构 DNA 探针能够通过 π-π 堆积作用吸附到 GO 的表面，导致其荧光信号完全猝灭。HCR 产物总会存在一段粘性末端从而靶定在 GO 表面，但其双螺旋核酸结构中的荧光基团由 于 DNA 双链的刚性结构却远离了 GO 表面，从而保持了较强的荧光信号。由于只有 HCR 产物的粘性末端吸附在了 GO 表面而富集在长双链上的荧光基团由于 DNA 双链的刚性 结构却远离了 GO 表面，从而保持了较强的荧光信号。这样，在氧化石墨烯的作用下达 到了对 HCR 反应前后荧光信号的区分，从而实现了 miRNA 的灵敏检测。关键词杂交链式反应（HCR）氧化石墨烯（GO）MicroRNA荧光传感器无酶 催化荧光成像AbstractAbstractMicroRNAs (miRNAs) are a class of endogenous, non-proteincoding,small RNA molecules(19–24 nucleotide). MiRNAs play key roles in gene expression regulation and many types of cancers or diseases are closely related to the abnormal expression of certain miRNAs. Therefore, the sensitive detection of speci?c miRNAs is of great signi?cance in clinical diagnosis. Since many important miRNAs of interest are in quite low abundance in biological samples,some nucleic acid ampli?cation techniques are generally required to achieve high sensitivity for miRNA detection. However, these nucleic acid ampli?cation techniques are highly enzyme-dependent,in which one or more types of