差别偶联比的毒死蜱、杀螟硫磷人工抗原的制备及表征.pdfVIP

不阚偶联比的毒死蜱、杀螟硫磷人工靛原的制各及教征 摘要 袭药的应震，对农业的增产增收具有重要的作震。然磁，隧着人们对农药 黎广泛避度使羹，对琢境生物安全察太类毽壤都产生了旨大危害。农药残蟹蕊 控制黜检测是目前急需解决的重爨问题。传统酌有机磷农药检测方法主簧是理 化分析方法，如利用气相色谱役、液相色谱仪、气一质联用仪、液一质联用仪等 进行农药残餐量的分攒方法，健这些方法耗盼长、成本高、滩黻满足瑷场快速 裣测的需要。丽建立在免疫分拼基础上熬农蓊免疫传感器蒋整成隽一释准确迅 速、简便廉价的农药残留检测方法。在农药残黼检测的免疫传感器中，半抗原 帮人工抗原的制备怒农药免疫传憋器研究与应用媳关键，欲对农药残留进行免 疫分橱，必须先蒜《餐滋农药入王抗暴，进嚣镦|螽爨撬塞静挽钵。嚣瑟，本论文 主要作了以下几个方丽的工作： 1．有机磷农药毒歹E蜱人工抗原的制备及表链 蓠宠对毒死辫进稽结携穆饰，毒琵薄缝构式中瞧睫环上第6整碳主的@募 子在碱性条捧下辩被3。巯基嚣黻取代，弓l入禽有羧基酌连接臂，得到毒豫蟀结 构衍擞物，并提出了多次水洗的方法对毒死蜱分子的衍生物进行了纯化，缀气． 矮联用仪(GC／MS)表征，反应艨料3．巯基丙酸可被除去，达到了纯化的隧酶。 与鬻熙熬过硅黢控缝纯方法稳戮，本方法吴蒋篱囊暴行、娥奉簧，污染少等突 出优点。然后分别通过活泼酯法、混合酸酐法、碳二皿胺法将毒死蜱衍生物与 牛血清白蛋白(BSA)偶联，并采用紫外光谱、红外光谱、GC／MS等方法进行 了表挺。结粟证骥，潋上三释方法豢霹鞋成功合成毒琵蟀入工挠原，经溅定馁 ‘ ．联比分潮为：23：羔，18：至，6：王。 此外还考察了不同的投料比、偶联时间对人工抗原偶联比的影响，投料比 选择羔：l，2：王，5：差三个水平，髑联时闻分别选择重、2、4、6、24h美个拳乎 进行最佳条律熬鞴定，维票表臻，不弱翁驾联潆褥霹天工撬藤懿器联魄蠢一定 的影响，偶联比先随着偶联时间的增长而逐渐增大，由16增加到27，谯6h之 后不辩随时间变化，说明蛋白质分子上的半抗原数目达到了最大。偶联比对抗 体蕊锚蚕毒重要影嗡。一般认麓，最毽戆羯联魄灸t0-20：1，本文偶联时阕为 lh对，偶联魄为16：熏，因此，满泼酯法合成毒死蜱入互抗艨瓣最毪偶联反瘦对 间选用lh。而不湖的反应投料比对人工抗原的偶联比影响不大，按上述投料比 进行实验，褥到的偶联篦依次为34：1，36：1，39：1，麸节约成本的角度考虑，我 不同偶联比的毒死蜱、杀螟硫磷人工抗原的制备及表征 们认为反应投料比选用l：l最佳。为毒死蜱免疫传感器的制备解决了一个关键技 术问题。 2．有机磷农药杀螟硫磷入工抗原的制备及表征 杀螟硫磷分子结构上缺少能够直接与蛋白质进行偶联的活性基团，焉杀螟 硫磷的初级代谢产物氨基杀螟硫磷的苯环上含有能与蛋白质连接的活性基团一 氨基，故氨基杀螟硫磷可为先导化合物与蛋白载体连接。采用醋酸．锌粉一盐酸法 还原，将杀螟硫磷分子上的硝基还原成氨基。经红外光谱仪、气一质联用仪 (GC／MS)表征，证明杀螟硫磷分子上的硝基确实已被还原成氨基。再分别采 用重氮化法、戊二醛法将还原的杀螟硫磷与牛血清白蛋白偶联，成功制备了人 工抗原。并采用紫外光谱、红外光谱等方法进行了表征，结果证明人工抗原合 成成功。经测定采用重氮化法和戊二醛法合成的入王抗原的偶联比分别隽37：1， 25：1，为杀螟硫磷免疫传感器的制备鳃决了一个关键问题。本方法与文献报道的 杀螟硫磷人工抗原的合成方法相比，具有合成步骤少，成本低，更简便宜行等 优点。 关键词：毒死蜱；杀螟硫磷；人工抗原；抗体：免疫分析 2 不同偶联比的毒死蜱、杀螟硫磷人工抗原的制备及袭槎 Abstract have a rolein Organphosphomspesticidesplayedkey extensiveuseof in hasraisedserious organp