吉非替尼对肺癌细胞a549 h1975放射敏感性的影响及机制研究-effect and mechanism of gefitinib on radiosensitivity of lung cancer cell line a549 h 1975.docxVIP

EGFR into the nucleus, the increased EGFR in kytoplasm （ T0min=18.1 ±0.306,t0min=12.3 ± 0.557;T15min=18.2 ± 0.306,t15min=11.1 ± 0.379;T30min=16.2 ±0.551,t30min=7.37±0.451;T60min=15.5±0.265,t60min=4.53±0.379; P 0.05）anddecreased in nucleus （ T15min=0.51 ± 0.050,t15min=4.93 ± 0.321;T30min=1.03 ± 0.115,t30min=5.20±0.361;T60min=0.81±0.025,t60min=5.70±0.458; P 0.05）;notfind the change in H1975 （ T0min=1.80 ± 0.042,t0min=1.73 ± 0.07;T15min=1.76 ± 0.043,t15min=1.51 ± 0.040;T30min=1.68 ± 0.040,t30min=1.75 ± 0.051;T60min=1.70 ±0.021,t60min=1.65±0.036; P 0.05）.Conclusion: Gefitinib enhances the radioresponse of A549 cells proberbly by suppressing EGFR transport into the nucleus; but have no influnce on H1975, with the relation of EGFR only staying in kytoplasmKey words: NSCLC; EGFR; TKI; Radiosensitivity; Gefitinib独创性声明本人郑重声明,所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的 研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已标明引用 的内容外，本论文不包含任何其他人或集体已经发表或撰写过的研 究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确 方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后 果。学位论文作者签名： 日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规 定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件 和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日前言放疗和分子靶向治疗是非小细胞肺癌的重要治疗手段，但针对 EGFR 的靶 向治疗只有小部分人受益，且易耐药。放射线可直接或间接作用于 DNA，导致 DNA 损伤，引发一系列细胞反应，包括对受损 DNA 的修复，而修复的结果就 是提高细胞的生存，这是肿瘤细胞对放疗抵抗的机制之一。一般认为，EGFR 活化后将磷酸化胞内端的特异性酪氨酸残基，激活胞内 下游信号传导通路，如 Ras/Raf/MAPK 和 PI3K/AKT，发挥调节细胞凋亡、转 移、增殖和有丝分裂等作用[1]。最近的研究显示，EGFR 除了通过上述信号转 导通路发挥作用以外，还有一种直接入核的途径[2]。厄洛替尼与放疗的协同作 用比较确定，其机制就是抑制了放疗后活化的 EGFR 进入核内激活 DNA-PK 进 行的 DSB 修复[3]。还有研究显示，吉非替尼与放疗联用可增加肿瘤细胞凋亡 率，主要机制同厄洛替尼相似也是抑制 EGFR 与 DNA-PK 的结合[4]。EGFR 的靶向药物可以提高 NSCLC 患者对放射线的敏感性，这其中有很多 机制尚未阐明。基于上述现象，本实验选取 A549 细胞，EGFR 为野生型； H1975 细胞，EGFR 为双重突变，L858R/T790M 作为研究对象[5]，分析吉非替 尼对放疗后 EGFR 状态不同的 NSCLC 细胞放射敏感性的影响，以及细胞核中 磷酸化 γ-H2AX（DSB 数量的特异性指标）表达水平[6]，分析 DSB 修复情况， 并研究加药后各组细胞 EGFR 在 X 线照射后核内外的变化。本课题拟探讨 EGFR 靶向药物与放射线联用后可能的作用机制，为 NSCLC 的综合治疗提供参 考。1. 实验材料材料和方法 1.1 细胞株: A549 细胞株由同济医院妇产科国家重点实验室惠赠;H1975 购于中国医学科学院基础医学研