家蝇pgrp-sc和cathepsinl基因的免疫相关功能分析-immune - related functional analysis of musca domestica pgrp - sc and cathepsinl genes.docxVIP

摘 摘 要 I I 摘 要 本论文以家蝇为研究对象，研究内容主要分为 2 个部分： 第 1 部分：PGRPs 作为模式识别受体，在抵抗外界微生物入侵中起到了重要的作用。 但是某些 PGRPs 在动物体内的功能还比较模糊。本研究中，通过转录组数据从家蝇体 内克隆得到基因 MdPGRP-SC。并借助 RNAi、real-time PCR 等技术分析了 MdPGRP-SC 基因在家蝇先天免疫中的作用。结果显示，MdPGRP-SC 基因作为组成性表达的因子负 调控 Imd 通路。该基因的下调加强 Imd 通路对于免疫刺激的敏感性。此外，研究过程中 发现下调 MdPGRP-SC 基因后，家蝇化蛹速度较野生型家蝇迟缓。所以，MdPGRP-SC 基因可能在家蝇的先天免疫和发育中都起到了重要作用。这有助于今后研究免疫和发育 的协同调节。 第 2 部分：组织蛋白酶 L（Cathepsin L）是类木瓜蛋白酶半胱氨酸蛋白酶家族的一 员。组织蛋白酶 L 在溶酶体内蛋白质末端降解中起作用，参与多种生理和病理过程。本 研究通过 RT-PCR 技术在家蝇中克隆得到组织蛋白酶 L（命名为 MdCathepsinL），其 cDNA 全长 1352 bp，开放阅读框 1122 bp，编码 373 个氨基酸残基。Real-time PCR 检测 该基因在各组织中均有表达，其中血细胞中的表达水平最高。借助 real-time PCR、northern blot、western blot 等技术分析 MdCathepsinL 在免疫刺激后的表达模式。结果显示用大 肠杆菌和金黄色葡萄球菌刺激后，MdCathepsinL的表达量显著上调，这表明组织蛋白 酶 L 的确与家蝇免疫相关。为了进一步研究组织蛋白酶 L 的功能，用昆虫细胞表达系统 对 MdCathepsin L 成熟肽进行了重组表达。这些工作为组织蛋白酶 L 的深入研究奠定基 础。 关键词 家蝇 肽聚糖识别蛋白 组织蛋白酶 L 先天免疫 发育 Ab Abstract II II Abstract This study with Muscadomesticacontains 2 parts. Part 1: The innate immune system constitutes the first line of defense against microorganisms in both vertebrates and invertebrates. As innate immune pattern recognition receptors, peptidoglycan recognition proteins (PGRPs) play important roles in dampening responses to microbial infection. However, the function of PGRPs in vivo for host defense remains unknown. In this study, the cDNA encoding PGRP-like peptide (designated MdPGRP-SC) was cloned from housefly Musca domestica. The function of MdPGRP-SC in M. domestica was addressed by RNA-interference (RNAi) approach. Additionally we analyzed the expression level of MdPGRP-SC in bacteria-challenged larvae, different developmental stages and different larval tissues. The results showed that absence of MdPGRP-SC made Imd pathway more sensitive to infection and induced over-transcription of the antibacterial peptides. And the pupation of depleted-MdPGRP-SC larvae was postponed compared to control. The study will give us deeper insight into the regulatory mechanism of the innate