建立分支dna技术用于hbv dna定量并评价微阵列芯片检测hbv耐药的性能特点-establishment of branched dna technology for hbv dna quantification and evaluation of performance characteristics of microarray chip for hbv drug resistance detection.docxVIP

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2018-08-14 发布于上海
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建立分支dna技术用于hbv dna定量并评价微阵列芯片检测hbv耐药的性能特点-establishment of branched dna technology for hbv dna quantification and evaluation of performance characteristics of microarray chip for hbv drug resistance detection

万方数据万方数据目录英汉缩略名词对照表 2 中文摘要 4 英文摘要 7 研究内容第一部分建立分支 DNA 技术定量检测 HBV DNA 及初步临床应用一、前言 10 二、材料和方法 13 三、结果 20 四、讨论 33 第二部分 DNA 微阵列芯片技术在乙肝病毒耐药基因检测中的应用及其评价一、前言 35 二、材料和方法37 三、结果 41 三、讨论 45 全文总结 47 参考文献 48 综述 51 致谢 61 2 英汉缩略语名词对照（Abbreviation）英文缩写英文全称中文名称 ADV Adefovir Dipivoxil 阿德福韦酯 bDNA Branched DNA 分支 DNA bp Base pair 碱基对 cccDNA covalently-closed circular DNA 共价闭合环状 DNA CHB Chronic viral hepatitis type B 慢性乙型肝炎 Ct Cycle threshold （PCR 荧光信号）阈值循环数 CT Chlamydia trachomatis 沙眼衣原体 CV Coefficient of variation 变异系数 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 EDTA Ethylenediaminete traacetic acid 乙二胺四乙酸 ETV Entecavir 恩替卡韦 HBV Hepatitis B Virus 乙型肝炎病毒 HCV Hepatitis C Virus 丙型肝炎病毒 HEPES 4- (2- Hydroxyethyl)- 1- piperazineethanesulfonic acid 4-羟乙基哌嗪乙磺酸 HPV Human papillomavirus 人乳头瘤病毒 HSV Herpes simplex virus, 单纯疱疹病毒 3 IFN Interferon 干扰素 LAM LdT Lamivudine Telbivudine 拉米夫定替比夫定 MALDI- TOF MS matrix assisted laser desorp tion/ionization time-of-flight mass spectrometry 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 min Minute 分钟 mg Milligram 毫克 NUCs nucleostide analogues 核苷酸类似物 ORF Open Reading Frame 开放读码框 RFLP restriction fragment length polymorphism 限制性片段长度多态性 Rnasin RNA inhibitor 核糖核酸酶抑制剂 rpm rotate per minute 每分钟转速 RT-qPCR Real-time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction 实时荧光定量聚合酶链反应 SDS Sodium Dodecyl Sulfate 十二烷基硫酸钠 4 建立分支 DNA 技术用于 HBV DNA 定量并评价微阵列芯片检测 HBV 耐药的性能特点中文摘要目的 1. 建立分支 DNA 信号放大技术（branched DNA, bDNA）定量检测乙型肝炎病毒 DNA（Hepatitis B Virus DN A, HBV DNA），并评价其性能特点及其临床应用价值，为将该技术应用于 HBV 感染的诊断和疗效判断奠定基础。 2. 评价 DNA 微阵列芯片法检测慢性乙型肝炎拉米夫定和阿德福韦酯耐药突变的性能特点及其临床应用价值。方法 1. 根据文献报道的中国HBV B、C型基因组全序列，设计一套碱性磷酸酶标记的探针，包括：捕获探针组、特异性捕获剂、标记体、前放大体探针组、放大体探针组和标记探针组，将捕获探针包被在96孔聚氯乙烯板上，依序与HBV DNA、前放大体探针组、放大体探针组、标记探针组杂交，将杂交信号级联放大，用北京源德生物有限公司JETLIA-962型发光仪检测化学发光信号值，计算结果。 2. 制备标准品：收集 5 例高 HBV DNA 载量的 HBV 感染者血清标本共 5 ml 作为标准品，用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time Fluorescent Quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）法连续 4 天对其 HBV DNA 进行定量，共定量 20 次，其平均值 1.87E+08 c