2 酶学与酶工程 第二章 学生.pptVIP

;第一节 酶的结构与功能;活性中心外的必需基团 ;;酶分子中的氨基酸残基或其侧链基团可以分为四类 1．接触残基 2．辅助残基 3．结构残基 4．非贡献残基;（二）酶活性中心中的化学基团的鉴别 1．非特异性共价修饰： 某些化学试剂能使蛋白质中氨基酸残基的侧链基团反应引起共价结合、氧化或还原修饰反应，使基团结构和性质发生变化。 如果某基团修饰后不引起酶活力的变化，就可初步认为此基团可能是非必需基团；反之，如修饰后引起酶活力的降低或丧失，则此基团可能是酶的必需基团。; 2．亲和标记 共价修饰剂是底物的类似物，可专一性地引入酶的活性中心，并具有活泼的化学基团(如卤素)，可与活性中心的基团形成稳定的共价键。因其作用机制是利用酶对底物类似物的亲和性而将酶共价标记的，故称为亲和标记。; 3．差别标记 在过量底物或可逆抑制剂遮蔽活性中心的情况下，加入共价修饰剂，使后者只修饰活性中心以外的有关基团；然后去除底物或可逆抑制剂，暴露活性中心，再用同位素标记的向一修饰剂作用于活性中心的同类基团；将酶水解后分离带有同位素的氯基酸，即可确定该氨基酸参与活性中心。 ;4．蛋白质工程 这是研究酶必需基闭和活性中心的最先进方法，即将酶蛋白相应的互补DNA(cDNA)定点突变，此突变的cDNA表达出只有一个或几个氨基酸被置换的酶蛋白，再测定其活性，可以知道被置换的氨基酸是否为活力所必需。 优点：;优点： 改变酶蛋白中任一氨基酸而不影响其他同类残基 改变疏水残基，使其转变成亲水或另一疏水残基 同时改变活性中心内外的几个氨基酸 个或多个氨基酸的缺乏或插入 改变酶蛋白的磷酸化位点或糖化位点 不致引起立体障碍; (三) 组成活性中心的重要化学基团 丝氨酸、组氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和赖氨酸 ;二、酶的结构和功能的关系;;（二）酶的二级和三级结构与催化功能的关系 酶的二级、三级结构是所有酶都必须具备的空间构型。维持酶的活性部位所必须的酶蛋白的二级和三级结构彻底改变，就会使酶遭受破坏而丧失其催化功能，这是蛋白质变性的依据。 1．酶的变性和失活 2．???性中心的挠性 3．酶分子的结构域;（三）酶的四级结构与催化功能的关系 具有四级结构的酶，按其功能可分为两类，一类与催化作用有关，另一类与代谢调节关系密切。;三、酶催化作用的基本理论;2. 酶与底物形成复合物的作用力 1）离子键 2）氢键 3）范德华力 ;（二）酶作用的专一性机制;2.诱导契合学说（induced-fit hypothesis） ;（三）酶作用的高效性机制;2. 酸碱催化(acid or base catalysis) 酸碱催化是通过瞬时地向反应物提供质子或从反应物接受质子以稳定过渡态、加速反应的一类催化机制。由于E活性中心含有酸碱基团,它们可以与S中的酸碱基团进行质子交换，加强了E与S的相互作用，减弱了S分子内部的化学键，使S由稳态→不稳态 狭义酸碱催化：H＋和OH－ （specific acid-base catalysis） 广义酸碱催化：质子供体和质子受体 （general acid-base catalysis;*;3. 共价催化(covalent catalysis) 共价催化又称亲核催化（nucleophilic catalysis）或亲电子催化（electrophilic catalysis） 亲核攻击集团： -OH，-SH，-N（咪唑基） 底物亲电中心： 磷酰基（P=O）酰基（C=O） 糖基（Glu-C-OH） ;底物中典型的亲电中心为磷酰基、酰基和糖基; 4．金属离子催化 5．多元催化 6．微环境的影响 ;7. 底物的变形（distortion）与张力作用（tensility) ;四、影响酶促反应速度的因素;2. 酶浓度的影响 反应速度与酶浓度成正比 ;*;3.温度的影响 ;4. pH的影响 pH-酶反应速率曲线与最适pH（optimum pH） ;*;5.激活剂和抑制剂 凡能增高酶活性的物质，称为酶的激活剂 凡能降低或抑制酶活性但并不使酶变性的物质称为酶的抑制剂 1）酶的激活剂;*;*;*;*;*;*;第二节酶在生物体内的几种存在方式;3.多酶复合体 多酶复合体是指几个酶联合而成的络合物，其中酶以非共价键彼此嵌合在一起。一般由2－6个功能相关的酶组成，这样更有利于生化反应的连续进行，以提高酶的催化效率，同时也便于机体对酶的调控。 1）多酶复合体组成成分的结合强度可能差别很大 2）在催化活性上没有直接相关的酶也可以组成多酶复合体 3）在细胞内各种多酶复合物还可能通过和细胞膜或细胞器结合在一起。从而通过相互邻近组成高效的物质和能量代谢系统。;二、同工酶