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超高液相在药物分析领域中应用 　　[摘要] 超高效液相色谱（UPLC）具有传统HPLC色谱所不具备的高分离能力、高灵敏度及专属性优势，针对超高液相在药物分析领域的广泛应用，本文对超高液相色谱及其与质谱联用技术在药物分析领域取得的成果，分别从药物成分分析、药代动力学两方面进行了详细阐述与总结。 　　[关键词] 超高液相；药物分析；液相色谱 　　[中图分类号] R917[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）04（b）-0013-02 　　自20世纪60年代液相色谱（LC）系统推出以来，液相色谱科学已成为现代色谱技术中最活跃的分析方法之一，逐步实现了高效液相色谱（HPLC）技术、超高效液相色谱（UPLC）系统在药物分析、环境科学、生化等多项科学领域中的应用[1]。使用1.7 nm颗粒度色谱柱填料的超高液相色谱，能够在更宽的线速度范围内保持恒定柱效，大幅度改善液相色谱的分离度与灵敏度，更为有力地加强液相色谱的分离能力，使超高液相色谱与质谱（UPLC-MS）组成的正交二维分离分析系统为化合物结构鉴定、复杂体系分离分析提供了巨大便利。药物分析作为一个较为成熟的领域，是直接关系到人们的健康和生命安全的基础研究领域。将UPLC-MS技术应用于国内仿制药检验，可无需再重复大量的药理毒理和临床试验，使患者在服用不同厂家生产的相同活性成分药物时能达到相同的治疗效果，对于生物等效性与药代动力学研究军均有显著意义显得；利用UPLC-MS技术对部分常用药物建立起相应的定量方法，也能够为药物在人体中使用的有效性与安全性提供有力的科学依据。 　　1 超高液相在药物成分分析中的应用 　　超高液相色谱技术的优势突出地反映在复杂化合物的分离分析方面。尤其是我国传统中药、中成药药剂成分复杂，一般是由多味中药按比例混合并经若干化学或物理反应步骤后制成的，利用现代病理学研究中药和中成药成分以提高药效是目前中药分析的重点，UPLC-MS首先就被应用于该领域。 　　居文政等[2]就通过高效液相色谱梯度洗脱法定量测定了大青叶中酮类成分，从质谱裂解组分中提取得到8种类黄酮，其中6种由3组同系物组成的类黄酮成分，相似性高，常规HPLC的灵敏度、分离度均无法满足实验要求。有学者应用酸提法、UPLC-MS以醋酸铵水溶液（含0.5%乙酸）-乙腈为流动性梯度洗脱，检验得出的黄连生物碱成分指纹图谱较HPLC-MS也更加清晰，定量分析的成分检出限也均低于相同实验条件下HPLC-MS的检出限。在中成药制剂的化学成分检验中，居文政等[3]提出了UPLC-MS快速检验镇静安神类中成药的方法，可对常见非法添加化学药品如硝西泮、艾司唑仑、苯巴比妥等快速地分离分析。也有采用UPLC-MS法检出了补肾壮阳类中成药中非法添加的枸橼酸西地那非。从实验过程来看，超高液相联合质谱法较传统的高效液相色谱技术具有更高的检测速度和灵敏度，且可实现多组样本的同时一步检测，简便快速。 　　2 超高液相在药代动力学研究中的应用 　　生物样品测定是药代动力学研究的基础前提，但药物样本分析通常均表现出取样量少、待测药物浓度低及内源性杂质多等限制性因素，这就要求检测方法必须具备灵敏、精确、可靠的特征[4]。目前90%以上的药物测定所采用的都是色谱法，UPLC-MS/MS作为药代动力学中的高灵敏度检测手段，应用范围越来越广泛。超高液相所采用的小粒径填料，不仅具有耐超高压的作用，对于改善色谱峰分离度、检测灵敏度同样也可起到明显效果，尤其适用于药物成分中微量混合物的分离及高通量研究[5]。相比较来看，UPLC-MS可减弱离子源处相互竞争的化合物间的离子抑制作用，降低代谢物的共流出，并由此检出更低浓度的代谢产物，使样本复杂体系分离、化合物结构鉴定更具效率。具体来讲，超高液相在药代动力学研究中的应用主要集中于以下三方面。 　　2.1 化学药品的代谢分析 　　从UPLC/HPLC-TOF（飞行时间质谱）-MS对人尿中乙酰氨基酚代谢产物的检验结果比较看，UPLC、HPLC均可检出乙酰氨基酚形成的硫酸化代谢产物，UPLC所获取的分离度、峰宽及色谱峰信息均显著优于HPLC，并能检出HPLC无法分离分析的葡萄糖苷代谢产物；联合MS发现的碎片离子信息进行的结构鉴定结果也证实，UPLC联用MS分离复杂化合物不仅能够大幅降低药品成分检验时间，灵敏度与分离度也较高，同时可有效降低因生物样品不纯造成的分析干扰。 　　2.2 中药和中成药的代谢分析 　　随着中药药理研究、天然药化等学科领域的发展，中药药物代谢动力学已成为中药学科现代化进程中的重点研究课题。由于中药品种复杂，药物成分呈低含量和多样化特征，体内代谢后所形成的化合物体系也更为复杂，对此，UPLC-MS同样表现出在西药药代动力学研究中反映出的类似优点，