足三里穴区不同层次感觉和运动神经元节段性分布研究.docVIP

足三里穴区不同层次感觉和运动神经元节段性分布研究 　　(中国中医研究院针灸所,100700;?1北京针灸骨伤学院解剖教研室) 　　摘　要　对足三里穴区不同层次感觉和运动神经元的节段性分布进行了研究。结果证明足三里穴区皮内、皮下、肌层的感觉运动神经的节段性分布略有不同。皮内注射其感觉神经元分布偏于头侧,相对数量较多,节段分布窄,较为集中,以中小细胞标记为主;皮下注射感觉神经元分布较少;肌层注射感觉神经元分布偏于尾侧数量较多,标记细胞节段分布宽,较为分散,以大中型细胞为主。因此,认为肌层的经穴神经分布可能与经脉脏腑相关的关系更为密切。 　　主题词　穴,足三里/神经支配　神经节,感觉　运动神经元 　　 　　不少学者[1,2]对穴位传入传出神经元的节段性分布进行了不少的研究,大部分的研究将穴位定位在肌层,而临床上常用的针灸穴位有深浅不等,因此研究不同层次下穴位的感觉和运动神经元的节段性分布对指导临床针灸的应用是十分必要的。本研究以足三里穴位为例,对皮内、皮下、肌层3种不同深度下穴位的传入、传出神经元的节段性分布进行了比较和研究,现汇报如下。 　　1　材料和方法 　　1.1　实验动物 　　中国中医研究院动物室提供的大白鼠,雌雄不拘,体重250～300 g 22只。 　　动物随机分为两组,甲组:右侧注射,深度为皮下;左侧注射,深度为肌层共12只。乙组:左侧注射,深度为肌层;右侧注射,深度为皮内共10只。因此肌层注射为22只侧,皮内为10只侧,皮下为12只侧。 　　药物:辣根过氧化物酶(HRP)Rz=6.0为上海化学试剂公司产品,四甲基联苯氨(TMB)、硝普钠均为美国Sigma公司产品,其他多聚甲醛、戊二醛、硫酸二氢钠、硫酸氢二钠、过氧化氢、铬明矾、明胶等均为北京化学试剂公司产品。 　　1.2　注射方法 　　取5%HRP的生理盐水溶液50 μl,应用微量注射器,根据比较解剖学的测量方法,于大白鼠胫骨外侧,胫骨粗隆下足三里穴,分别垂直进针(肌层)、45度进针(皮下)和10度进针(皮内)在皮内打成皮丘。注射的范围约0.5 cm左右。注射后动物存活72 h。 　　灌流和取材:动物用1%戊巴比妥钠过量麻醉后,经主动脉插管灌流,顺序注入4%枸缘酸钠200 ml,0.9%氯化钠溶液200 ml,1%多聚??醛+1.25%戊二醛的磷酸盐缓冲液和10%的0.1 M(pH 7.4)的磷酸盐缓冲液,固定液灌流时间不少于20 min,灌流后取L?1～S?3的脊髓和背根节,分别放入20%的蔗糖0.1 M(pH7.4)磷酸盐缓冲液,贮存过夜。 　　冰冻厚40 μm,切片裱于涂有铬明矾明胶的玻片上,切片经蒸馏水冲洗后,经四甲基联苯胺(TMB)显色[3],中性红复染,上行脱水后二甲苯透明,树脂胶封固,光学显微镜下观察。 　　2　结果 　　标记细胞的确定:标记神经元的胞浆内充满黑蓝色的小圆形颗粒,其胞核区无标记物存在形成中空的圆形缺损,未被标记的细胞胞浆内有中性红复染后可显粉红色颗粒。 　　足三里穴肌层注射HRP后,在标记的脊髓背根神经节细胞主要见于L3～S2的节段,细胞以大中型细胞为多,标记细胞高峰见于L?4和L5占标记细胞总数的75%以上。其中L3占6.2%,L?4占30.4%,L5占45.1%,S1占14.2%,S2占4.1%。其在脊髓前角也见有大量标记细胞,主要见于L5和S1,其标记细胞在前角细胞位置主要见于前角后侧。 　　足三里穴皮下注射HRP后,其标记细胞的数量明显少,在背根节中标记细胞的数量仅为肌肉注射细胞数量的4～5分之一。细胞仍是大中型细胞为主,其标记细胞的高峰以L?4为主,范围为L3～S1。L3占10%,L?4占50%,L5占25%,S?1占15%。其在脊髓前角中细胞数量也远不如肌层注射多,其数量约为肌层3～4分之一。其标记细胞与肌层的相比,细胞位置偏于前角的前内侧。 　　足三里穴区皮内注射HRP后,其在脊髓背根节中的标记细胞数量比肌层注射相对要少;而比皮下注射的明显要多。其大、中、小型标记细胞均可见,但以小型标记细胞为主。标记细胞的范围为L2～L5,与肌层注射相比有明显前移现象,而且高峰区集中在L3节段。其中L2占2.1%,L3占93.4%,L?4占3.4%,L5占1.1%。在脊髓前角的标记神经元数量明显少于肌肉与皮下,不足皮下的二分之一,仅为肌肉的7～8分之一。细胞位置与皮下位置大致相同。具体内容详见表1。 　　3　讨论 　　本研究结果证明足三里穴区肌肉层、皮下层、皮内层和各层间的神经分布略有不同。根据其在背根节标记细胞的数量,分析其感觉神经末梢的分布多少的顺序是肌层最多、皮内次之、皮下最少,其节段分布肌层最宽(L3～S2)、皮内最窄(L2～L5)、皮下居中(L3～S1)。在背根节标记细胞大小,肌层以大中