跌打止痛散质量标准研究.docVIP

跌打止痛散质量标准研究 　　【摘要】目的：建立跌打止痛散质量控制方法。方法：采用TLC法对红花、当归、赤芍进行定性鉴别；采用HPLC法测定跌打止痛散中大黄素的含量，选用Hypersil C18色谱柱，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)，检测波长254nm。结果：TLC检出了红花、当归、赤芍特征斑点；大黄素在0.0375～0. 375μg范围内线性关系良好（r=0．9996）；加样回收率为98.11％，RSD=1.40％。结论：方法简便、灵敏、重复性好，可作为该制剂的质量控制标准。 　　【关键词】跌打止痛散质量标准HPLC法大黄素 　　 　　跌打止痛散收载于《卫生部药品标准.中药成方制剂》（WS3-B-1444-93 ）[1]，由红花、大黄、儿茶、三七 等13味药组成，具有散瘀止痛的作用，临床用于用于跌打损伤，瘀滞肿痛的治疗疗效显著。标准中只收载了显微鉴别项，无薄层鉴别及含量测定监控指标,难以控制其内在质量。本文对其定性、定量方法进行探索，现将结果报道如下 　　1仪器、试药与材料 　　Agilent1100高效液相色谱仪（美国HP公司），大连依利特色谱柱（Hypersil ODS24.6 ×200mm，5μm）。甲醇、磷酸为色谱纯；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。药材购自湖南海川医药有限公司；人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品（批号：110703-200424、110704-200420、110745-200517）、芍药苷对照品（批号：110736-200629）、大黄素对照品（批号：110756-200110，供含量测定用）、红花对照药材（批号：120907-200609）均为中国药品生物制品检定所提供。跌打止痛散样品为鞍山制药有限公司（批号分别201010102010101420101211）。 　　2方法与结果 　　2.1薄层鉴别研究 　　2.1.1红花取本品5g，加80%丙酮溶液20mL，超声处理30min，滤过，取上清液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。见图1。 　　2.1.2三七取本品5g，加水2ml，搅匀，再加以水???和的正丁醇5ml，密塞，振摇10分钟，放置2小时，离心，取上清液，加3倍量以正丁醇饱和的水，摇匀，离心，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5?l，点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点。见图2。 　　2.1.3赤芍取本品5g，加乙醇30mL，超声处理15min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。见图3。 　　图1 红花TLC彩照图2 三七TLC彩照 图3 赤芍TLC彩照 　　2.2大黄素含量测定[2、3]参考《中国药典》2010年版一部大黄项下大黄素的含量方法及相关文献资料进行测定。 　　2.2.1色谱条件与系统适用性试验大连依利特色谱柱（Hypersil ODS24.6 ×200mm，5μm）; 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)为流动相；检测波长为254nm；柱温28℃；分离度大于1.5，理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。 　　2.2.2供试品溶液制备取本品约1g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇100ml，加热提取至提取液无色，取提取液，置水浴上蒸干，残渣加2.5mol／ml硫酸溶液10ml溶解至锥形瓶中，加氯仿10ml，